笔记内容是根据张晓飞老师的《P16/Ki-67经验分享》讲课内容所整理，如有侵权，请联系删除！
辅助宫颈细胞学检查、HR-HPV检测：
1） HPV初筛阳性的女性；
2） 联合筛查结果不一致（细胞学阳性/HPV阳性）的女性；
3） 细胞学初筛结果为不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）/低度鳞状上皮内病变（LSIL）的女性；
4） 年轻有生育需要而细胞学阳性或HPV阳性却无法行阴道镜检查的女性。
子宫颈P16/Ki-67免疫细胞化学双染检测可作为宫颈细胞学检查和HR-HPV检测两类筛查方法的补充。
P16蛋白在细胞周期中起抗细胞增殖的作用，在正常分化成熟的细胞，免疫细胞学技术是不能检测出P16的表达，当高危HPV病毒感染宫颈上皮，细胞出现异常的增殖，P16蛋白表达增加，P16表达阳性，Ki-67作为细胞增殖指标，正常细胞这两个蛋白不会同时表达，如果同时表达说明细胞周期处于失调状态，反映宫颈上皮是高级别上皮内病变，是不依赖于形态学的客观指标。
二 P16/Ki-67判读标准：
它的判读是独立于细胞形态学之外的，只要有一个双染阳性的细胞就就是阳性结果，
常见的染色模式有两种，一种胞质棕色，胞核红色，另一种相反，必须要共同定位于同一细胞之内。用显微镜的主微调，有共同的改变就提示为共同一个细胞内。
图中胞质棕色，胞核红色，染色强度不论从强到弱，都是可以作为判读阳性的依据，红色是Ki- 67的信号，红色在细胞核内有两种模式，一种是斑点状，一种是均匀的染色。
这4张图片是非常经典的双染阳性案例，胞质是棕色，和背景中对比，胞质和胞核都是蓝色的，
绿色箭头是阴性的，因为核是棕色的。
有时胞质染得非常深，一团黑或者一团棕色，调亮显微镜的光亮度，有助于判断到底是不是核红色，
细胞簇，核是红色的，胞浆是强棕色，要判断这些细胞是不是在同一个平面上，经过调焦之后，确定在同一个平面上，因此是阳性结果。
这两张同样具有棕色的胞质，红色的胞核，可以看见核似乎是覆盖在胞质上，它们不在同一个平面上，因此是阴性结果。
阴性结果有三种情况，一种是仅仅有蓝色的复染，就是没有棕色，也没有红色；一种是因为P16不仅有胞质染色，胞核也会着色，就是只有p16一个着色；第3种是胞质没有着色，只有胞核红的着色，这三种情况都是阴性。
这两张是典型的阴性案例，不在一个平面，左边胞质和胞核都是棕色，右边仅仅看见胞核是红色的，没有看见胞质棕色。
在判读之前必须养成良好的习惯，有一个判读的流程，
1 跟观察常规细胞涂片一样，是在10倍镜下观察，按照顺序不能漏过每一个视野。
2 寻找孤立双染阳性细胞，
1）胞质棕色，胞核是红色，确定是在同一个平面上才可以。
2）如果染色非常深，要增加显微镜的光亮度，来确定胞核是不是红色。
3 如果没有找到孤立的双染阳性细胞，只看见一堆细胞簇，只能对细胞簇进行判读，细胞簇的判读比较困难，
观察细胞簇的边缘，如果边缘有同一个细胞胞质棕色、胞核红色，就是阳性病例，如果边缘没有发现双染阳性，对整个细胞簇的染色进行判断P16是不是弥漫阳，即所有细胞连续都是棕色，如果是弥漫着色，再看胞核是不是红色，是不是在同一个平面上？
如果P16着色是不连续的，细胞簇的结果就是阴性，
图中细胞簇的边缘，箭头所指三个细胞，有棕色的胞质，红色的胞核，是双染阳性细胞。
这个细胞簇因为棕色比较强，边缘看不见双染阳性细胞，
高倍，在强而弥漫的棕色胞质下，可见红色的胞核，是双染阳性细胞。
用二氨基联苯胺或者是快红不可避免的会造成非特异性的背景着色，给判读带来挑战。
指南中明确提出，如果玻片75%以上存在非特异性染色，样本不可被评估，应报告样本不满足判读条件，需注意75%是针对掩盖了上皮细胞，因为观察的目标是上皮细胞模糊的元素，可以是细菌、血液、粘液和炎症。模糊的元素不可以作为参考的对象，
非特性染色有两种，一种是胞质背景中出现非特异性棕色，另一种是非特异性红色。
非特异性棕色主要干扰对胞质的判断，要界定两类细胞，一类是参考细胞，是表层和中层细胞，还有一类是目标细胞，要观察细胞到底是不是双染细胞。
如果目标细胞的胞质着色比参考细胞深，就可以作为判读阳性的证据。
非特异性红色背景有两种情况，要看胞核红色的着色模式，如果是颗粒状、点状模式，在胞质或者参考细胞的胞质或者细胞外，同样出现红色颗粒状物，这个细胞不能作为双染阳性的证据；当红色的核是均一红色，不论周围出现红色颗粒状着色，可作为双染判读。
比如背景中可以看见有4个细胞，黄色箭头的细胞胞质是微弱的棕色，判定是非特异性着色，其右侧胞质染色深，但核也是棕色，是P16非特异性着色，不是双染阳性细胞，红箭头的细胞有棕色胞质，比背景参考细胞胞质更深的棕色，红色胞核，是双染阳性细胞。
血液或者粘液造成的背景模糊元素，胞核红色，Ki-67退化的细胞，不能作为双染阳性判读，
细胞外红色或者棕色颗粒状物，核也有红色颗粒状物，不能作为判读双染阳性的证据，
细胞有重叠，胞质有微弱棕色颗粒，有非特异性着色，绿色箭头这三个细胞，胞质更深的棕色，胞核有红色颗粒状着色，虽然非常微弱，但是双染阳性的细胞。
浅蓝色箭头指的三个细胞，不论胞质和胞核的染色都深，也是双染阳性细胞。
三 P16/Ki-67细胞学双染疑判读分享：
阳性，染色淡
背景中有非特性污染的元素，所以背景中的中表层鳞状细胞不能作为参考依据。
图中细胞非常微弱，胞质染色深，胞核有微弱的红色，因此判读阳性，但是对于这样的阳性结构，通常心里可能会有一些不安，
其它视野，背景中的鳞状上皮有明显的棕色着色，核也非常明显，因此是阳性。
高级别病变细胞胞质有时非常少，核浆比高，如左图圈里的4个细胞，可见红色着色，外面似乎有淡淡的细胞轮廓，里面有棕色的着色，到底是不是阳性不是很自信。
右图，同一个病人的涂片，红色非常强，在红色的边缘，可见少量胞质棕色，是阳性结果。
真正的裸核，核会有一些退化，周围基本一点胞质都没有，这个周围还是有胞质的，因此是阳性结果。
阴性，细胞簇
细胞簇，在细胞簇的边缘没有发现双染阳性的细胞，整个细胞簇是有着色，弥漫的，黄棕色和蓝色掺在一起，因此是局灶阳性，是双染阴性的结果。
涂片背景中不可避免会有由于血液或者粘液造成的模糊元素，
还是一张比较好的双染涂片，周围参考的中表层鳞状上皮的胞质没有非特异性着色，中间一堆细胞可见胞浆比较少的细胞，胞质棕色，
高倍镜下，再把光线调亮一点，发现这三个细胞的胞核还是棕色的，两个细胞胞核有微弱的红色，因此是双染阳性细胞，
在判读的时候，要不停调光线或者调焦距来判断到底是不是双染阳性细胞，
非特异着色
这张图片鳞状上皮有重叠，但是里面会出现不均匀的微弱的棕色颗粒，所以这些细胞都是非特异性着色，有三个细胞，其中两个细胞的核是棕色的，胞质的强度差不多，有点重叠，难以判读，上方这个细胞胞质染色加深，核是红色的，因此是双染阳性的细胞。
四 P16/Ki-67细胞学双染判读应用分享：
细胞学和高危HPV检测结果不一致时，可以推荐双染检测，有助于进一步的分流指导下一步治疗。
指导孕妇，分娩之后再进行复查，分娩后6个月复查，TCT和HPV都转阴了，辅助特殊人群管理加作双染。
