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外阴阴道念珠菌病（VVC）是一种常见的真菌性阴道炎。研究者认为巨噬细胞在吞噬真菌孢子、菌丝和免疫防御中起重要作用。巨噬细胞呈现多种活化类型，以M1型和M2型两种极化类型较为常见。M1型极化因子如诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α、白细胞介素（IL）-1β和CD86，M2型极化因子如精氨酸酶1（Arg-1）、IL-10、转化生长因子β和CD206等，它们可以根据宿主微环境状态参与免疫调节与组织修复。吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO1）是一种细胞内含有血红素的酶，它不仅对色氨酸代谢发挥作用，还参与宿主先天性抗感染反应。在宿主处于炎症环境时，IDO1的作用可能主要体现在维持宿主内环境的稳态平衡，以及有效缓解过度的炎症反应。本研究建立小鼠VVC模型，探讨调控IDO1对巨噬细胞功能的影响，为VVC研究提供理论支持。IDO1影响外阴阴道念珠菌病小鼠阴道组织中巨噬细胞功能变化的研究
唐诗琴1 郝瑞英1 贺慧娜1 田亚楠1 徐艳艳2，3 李小静3，4 景婷婷2，3
1河北工程大学临床医学院，邯郸 056002；2河北工程大学附属医院皮肤科，邯郸 056002；3河北省免疫性皮肤病实验室，邯郸 056002；4河北工程大学，邯郸 056038
【引用本文】 唐诗琴，郝瑞英，贺慧娜，等. IDO1影响外阴阴道念珠菌病小鼠阴道组织中巨噬细胞功能变化的研究[J]．中华皮肤科杂志，2024, 57（10）：931-939. doi：10.35541/cjd.20240163
40只无特定病原级雌性ICR小鼠按完全随机法分为4组：空白组、VVC模型组、VVC模型 + 1-甲基色氨酸组（简称1-MT组）、VVC模型 + γ干扰素组（简称IFN-γ组），每组10只。除空白组外，在造模前6 d，每隔1天予小鼠腹部皮下注射苯甲酸雌二醇油剂诱导假发情；发情成功后开始建模，继续皮下注射苯甲酸雌二醇油剂，予小鼠阴道接种2 × 109 CFU/ml白念珠菌菌悬液，每天1次，连续5 d；1-MT组和IFN-γ组分别在接种菌悬液前1 d予1-MT或IFN-γ预处理，之后每天1次，连续干预6 d；空白组和VVC模型组给予相应的生理氯化钠溶液。在造模第5天时，观察小鼠阴道情况，并进行阴道症状评分；收集阴道灌洗液涂片镜检和真菌载荷计数；随后处死小鼠，收集阴道组织，分别进行苏木精-伊红（HE）染色及过碘酸希夫（PAS）染色，免疫荧光法检测组织中IDO1和巨噬细胞表面标志物F4/80的表达；实时荧光定量PCR（qPCR）检测组织中IDO1、iNOS、Arg-1 mRNA表达水平，Western印迹检测组织中IDO1蛋白表达。采用单因素方差分析检验组间各指标的差异，Tukey检验进行两两多重比较。
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图1 吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO1）抑制剂1-甲基色氨酸（1-MT）和激活剂γ干扰素（IFN-γ）对外阴阴道念珠菌病（VVC）模型小鼠阴道灌洗液中白念珠菌菌丝形态的影响（× 400） 空白组小鼠阴道灌洗液涂片中未见白念珠菌菌丝和孢子；VVC模型组菌丝细长，见少量孢子；1-MT组见大量细长菌丝，聚集成团，周围可见孢子；IFN-γ组见少量细短菌丝，孢子较多。红色箭头均指向菌丝
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图2 吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO1）抑制剂1-甲基色氨酸（1-MT）和激活剂γ干扰素（IFN-γ）对外阴阴道念珠菌病（VVC）模型小鼠阴道灌洗液中真菌计数的影响 空白组未见白念珠菌生长；1-MT组白念珠菌载菌量明显高于VVC模型组和IFN-γ组
造模第5天，小鼠阴道灌洗液涂片镜检，VVC模型组中菌丝细长，见少量孢子；1-MT组大量细长菌丝聚集成团，周围可见孢子；IFN-γ组见少量细短菌丝，孢子较多。小鼠阴道灌洗液载菌量计数显示，与VVC模型组载菌量（360.0 ± 15.9）相比，1-MT组较高（523.7 ± 67.7，P = 0.002），而IFN-γ组较低（258.3 ± 27.6，P = 0.026）。HE染色和PAS染色显示，VVC模型组表皮局灶可见小脓肿形成，表皮及真皮全层见以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润，且存在大量孢子，伴少量菌丝；1-MT组表皮增生、增厚，真皮可见大量以中性粒细胞为主的炎症细胞弥漫性浸润，表皮及真皮全层大量菌丝和孢子聚集成团，以菌丝为主；IFN-γ组表皮聚集孢子，未见明显菌丝，真皮见少量以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润。免疫荧光检测显示，IFN-γ组IDO1相对荧光强度最高，而1-MT组F4/80相对荧光强度最高。Western印迹结果显示，VVC模型组IDO1蛋白表达显著高于空白组（P＜0.001）和1-MT组（P＜0.05），低于IFN-γ组（P＜0.05）。qPCR检测显示，VVC模型组iNOS mRNA表达高于空白组（P＜0.01），IFN-γ组高于空白组、VVC模型组和1-MT组（均P＜0.001）；VVC模型组Arg-1 mRNA表达显著高于空白组（P＜0.001）及IFN-γ组（P＜0.01），1-MT组显著高于空白组、VVC模型组和IFN-γ组（均P＜0.001）。在VVC小鼠模型中上调IDO1可能引起巨噬细胞向M1极化，抑制IDO1引起巨噬细胞募集增多，炎症反应加剧。
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