肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）是一种常见的细菌性病原体，属于机会性细菌，通常存在于人和动物的肠道和皮肤上，是肠道正常菌群的一部分，但某些菌株具有致病性，其高毒力和多重耐药性问题不容忽视。可引起各种感染，甚至严重的器官损伤和威胁生命的疾病，成为医院感染和社区获得性感染的主要致病菌之一，如肺炎、腹膜炎、尿路感染和血流感染等。这些感染在免疫功能低下的人群中尤为常见，如老年人、住院患者和免疫抑制剂使用者。感染的症状因感染部位和严重程度而有所不同，常见症状包括发热、咳嗽、呼吸困难、腹痛、尿频、尿急等。
相较于经典肺炎克雷伯菌（classical K. pneumoniae, cKP），高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent K. pneumoniae, hvKP）是更易引发严重侵袭性和播散性感染的菌株，近年来世界范围内hvKP感染的报道不断增长，并表现出广泛的耐药性。近期，中日友好医院的曹彬教授团队在Science Bulletin期刊发表综述，系统阐述了由高毒力和多重耐药性整合形成的碳青霉烯类耐药hvKP（CR-hvKP）的主要抗菌药耐药机制、毒力因素、临床表现和预后结果，探讨了CR-hvKP在我国的可能演化过程和流行情况。然而，目前有关hvKP的检测流程和鉴定方法尚无统一标准，为促进其实验室筛查与鉴定、流行病学和临床特征的科学研究，国内该领域的专家深入研讨，近期由中国老年医学学会检验医学分会、上海市医学会检验医学专科分会、上海市微生物学会临床微生物学专业委员会共同发布了《高毒力肺炎克雷伯菌实验室检测专家共识》，以规范hvKP的鉴定和鉴别方法，明确诊断hvKP感染。
hvKP病原学特征
区别于cKP主要来源院内感染，hvKP多分离自社区获得性感染患者，可引起多部位侵袭性感染，通常进展迅速、预后差，且病死率极高。
hvKP的毒力因子包括荚膜（K抗原）、脂多糖（O抗原）、菌毛、铁载体、外膜蛋白（如转运蛋白PEG-344、PEG-1631、PEG-589等）和6型分泌系统（T6SS）等，其中荚膜和铁载体是其毒力的主导因素。
常用的hvKP的分子分型方法依据荚膜血清型，此外，多位点序列分型（multilocus sequence typing, MLST）作为最常用于细菌分型的分子生物学方法，可用于分析菌株的基因型和同源性。
肺炎克雷伯菌是多重耐药细菌（multi-drug resistant bacteria, MDRB）中最常见的一种，据耐药监测网数据显示，其中碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant K. pneumoniae，CRKP）占比超过20%。近年来，包括多重耐药（multiple-drug resistant, MDR）、泛耐药（extensively-drug resistant, XDR）甚至全耐药（pan-drug resistant, PDR）的hvKP耐药菌株的报道不断增长，极大影响了hvKP感染的临床治疗。相关耐药机制与cKP一致，主要包括：头孢菌素类抗菌药物耐药，碳青霉烯类抗菌药物耐药，多黏菌素、替加环素和头孢他啶-阿维巴坦耐药。
hvKP检测
hvKP常规镜检和分离培养是目前细菌感染性疾病中病原学鉴定的金标准，与cKP一致，其生化表型鉴定也几无差别，耐药性分析也与常规cKP的体外药物敏感性试验方法一致。
由于确认hvKP菌株的金标准动物实验在常规临床微生物实验室中难以实施，当前临床常采用表型和基因检测方法进行hvKP检测和毒力评估。hvKP生物学活性（毒力）确认包括：拉丝试验、荚膜分型、铁载体检测和毒力表型检测。
其中荚膜分型主要有免疫学方法和分子生物学方法两种，前者基于荚膜K抗原的传统血清学分型，后者即wzi分型——通过PCR技术扩增出荚膜聚合酶基因wzi，进而比对分析菌株K型——是一种快速简便的筛查手段和方法。
铁载体检测是鉴别cKP和hvKP的重要指标，包括定性分析和定量分析。
hvKP的毒力表型检测可采用体外试验或动物实验验证，前者操作较为简便，包括人中性粒细胞杀菌活性试验、血清抗性实验，后者在临床实验室的常规检测中甚少应用，在科学研究中则应用较多。
需要注意的是，hvKP特异性基因序列确认包括：hvKP相关毒力基因检测，hvKP的高通量测序，以及质谱鉴定。
由于hvKP相关毒力基因很大程度决定了hvKP是否具有高毒力，目前常采用peg344、iroB、iucA、rmpA和rmpA2毒力基因联合鉴定——一般采用PCR方法（普通PCR或多重PCR），可以准确区分hvKP和cKP ——准确度可达95%以上，是鉴定hvKP的“金标准”。目前毒力基因PCR检测因时间短、可操作性强，临床应用越来越广泛。
hvKP的二代测序（next generation sequencing，NGS）方法，直接检测分离培养出的菌株或原始样本全基因组，通过识别pLVPK样或pK2044样毒力质粒，以及荚膜合成基因座（K基因座），快速确认hvKP。
另外基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time-of- flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS）可区分K1型hvKP，但最好与传统的基因分型技术一起应用为早期快速诊断提供参考。
hvKP检测流程和检测方法推荐
检测流程和方法推荐如下图所示，其中检测报告应该包括：
撰写 | 李敏
校稿 编审 | 缪为民 刘娟
编辑 | 谭易秋子
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