乙型肝炎（HBV）病毒复制由cccDNA模板驱动，在慢性感染中，cccDNA的转录受到表观遗传机制的严重调控。Tune-401是Tune Therapeutics 公司采用“TEMPO”平台开发用于慢性乙型肝炎治疗的脂质纳米颗粒(LNP)包裹核酸疗法。
Tune-401 中的 LNP 封装了一种 mRNA，可使表观遗传沉默器（“表观沉默器”）瞬时蛋白表达。这种表观沉默子的设计目的是在共同包装的引导核糖核酸的帮助下，精确地靶向并结合高度保守的 HBV DNA 序列。一旦与 HBV DNA 靶点结合，Tune-401 表观沉默子就能建立抑制性表观遗传状态，而不会损伤或切割 DNA。
单剂量使用 Tune-401 后，cccDNA 和整合 HBV DNA（“intDNA”）中的 HBV 转录都会因这种表观遗传抑制而持久沉默。
使用受感染的 PHH 检测 Tune-401 对 cccDNA 的抑制作用，使用 Hep3B 细胞系检测 Tune-401 对 intDNA 的抑制作用。利用受 HBV 感染的 FRG 嵌合肝小鼠（Fah-/-, Rag2-/-, Il2rg-/-）来评估 Tune-401 在真正的体内 HBV 感染中的表现。利用一种肝基因靶点（PCSK9）的替代性表观沉默剂来了解非人灵长类动物（NHP）模型中表观沉默的持久性。
研究结果显示，Tune-401 能够抑制来自 cccDNA 的 3.5 kb HBV RNA，抑制率高达 99.99%（见附图），细胞外 HBsAg 水平也受到类似抑制。同样，Tune-401 也能强烈抑制来自 intDNA 的总 HBV RNA 和细胞外 HBsAg。使用 Tune-401 后，HBV RNA 抑制的增加伴随着 HBV DNA 甲基化的增加，单次用药后的持续时间长达 550 天。
通过 RNA-seq 对非靶点特征的分析表明，Tune-401 可精确靶向 HBV，整个人类转录组几乎没有发生变化。在受感染的 FRG 小鼠体内发现了 Tune-401 持久的体内活性，用 PCSK9 替代性表观沉默剂处理 NHPs 表明，在单次瞬时剂量后，PCSK9 在治疗相关水平上被抑制了一年多。
Tune-401以一种非常精确的方式实现了对cccDNA和intDNA的强效和持久的转录抑制。由 Tune-401实现的HBV表观沉默代表了一种新的可能实现慢性乙型肝炎患者功能性治愈的范式，这款药预计将在2025年开始进行临床试验。
除 Tune Therapeutics 的 Tune-401 旨在用药一次实现慢乙肝功能性治愈的疗法外， 目前已知还有 Chroma Medicine 公司的表观遗传编辑器 CRMA-1001 和益杰立科的 EPI-003也采用类似的一针疗法。 依目前公开信息判断，Tune Therapeutics 的 Tune-401 有可能会第一个闯关首次人体临床试验，拭目以待吧。（更多肝病新药研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号）
