侵袭性金黄色葡萄球菌的分子特征、抗生素敏感性和生物膜形成能力

健康   2024-07-10 19:31   江苏  



编译:常州市第一人民医院  龚浩


编者按:

金黄色葡萄球菌可引起从轻微皮肤感染到危及生命的侵袭性疾病等各种感染。在关键毒力因子中,生物膜的形成是其致病的关键因素。

多位点序列分型(MLST)、spa 分型和 SCCmec 分型等分子分型技术,为了解包括 MRSA 在内的金黄色葡萄球菌种群的遗传多样性和克隆分布提供了重要依据。

对侵袭性感染中分离出的金黄色葡萄球菌的主要菌系、毒力因子、抗生素耐药性特征和生物膜形成能力进行鉴定有助于制定有效的感染控制和治疗策略。


材料与方法


研究对象:

从南昌市第一医院收集了 96 株侵袭性金黄色葡萄球菌分离株(每名患者分离一个分离株),血琼脂平板上进行培养,并在 37°C、5%CO2 环境中孵育 24 小时。随后,采用 VITEK-2Compact 进行细菌鉴定。使用金黄色葡萄球菌 ATCC25923 用作对照菌株。

研究设计:

使用多位点序列分型 (MLST)、spa 分型和染色体盒 mec(SCCmec) 分型,对总共 92 株来自侵袭性感染的非重复金黄色葡萄球菌分离株进行了分析。使用纸片扩散和琼脂稀释方法进行抗生素敏感性测试。使用结晶紫测定评估生物膜形成能力。使用 PCR 和 RT-qPCR 检查生物膜相关基因的存在和表达。

结果


研究共分离出 96 株金黄色葡萄球菌分离株,55 株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和 41 株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中,均表现出遗传多样性。

所有 96 株分离物中共鉴定出 12 种不同的序列类型,其中 ST59 是最常见的克隆 (25.0%,24/96); 其次是 ST7(16.7%,16/96)、ST188(14.6%,14/96)、ST398(11.5%,11/96)、ST5(0.9%,9/96)、ST239(0.6%,6/96)。

值得注意的是,MRSA 以 ST59(43.6%)为主,MSSA 以 ST7(39.0%)为主,其余每种序列类型的分离株不超过 5 株。结果如下表 1 所示。

▼表 1 侵袭性金黄色葡萄球菌分离株的分子特性


所有分离株都对万古霉素和利奈唑胺敏感。在 96 株菌株中,66.7%(64/96) 的金黄色葡萄球菌对三种或三种以上的抗微生物药物具有耐药性,属于多重耐药菌株。

该类别包括 50 株 (52.1%)MRSA 和 14 株 (14.6%)MSSA 分离株。与 MSSA 分离株相比,MRSA 表现出更高的抗生素耐药率。在 MRSA 分离株中,50 株 (52.1%) 对 3 种及以上抗生素耐药,43 株 (44.8%) 对 4 种及以上抗生素耐药,28 株 (29.2%) 对 5 种及以上抗生素耐药。

在 MSSA 分离株中,14 株 (14.6%) 对 3 种及以上抗生素耐药,8 株 (8.3%) 对 4 种及以上抗生素耐药,3 株 (3.1%) 对 5 种及以上抗生素耐药。值得注意的事,ST239 菌株显示出多药耐药表型,对所有测试抗生素的耐药水平都很高 (≥80%)。

ST59 菌株对青霉素 (100.0%)、oxacillin(100.0%)、克林霉素 (70.8%) 和红霉素 (70.8%) 的耐药率较高。ST7、ST188 和 ST398 分离株对青霉素的耐药率分别为 100%、78.6% 和 81.8%,高于其他抗生素。金黄色葡萄球菌侵袭性感染耐药谱如下表 2 所示。

▼表 2 金黄色葡萄球菌侵袭性感染的耐药谱


生物膜形成分析显示,88.5%(85/96)的分离菌行成了生物膜,如下图 1A 所示,其中 26.0%(25/96) 的分离株存在强生物膜形成,62.5%(60/96) 的分离株存在弱生物膜形成。MSSA 菌株比 MRSA 菌株表现出更高的生物膜形成能力 (图 1B)。

图 1C 揭示了不同序列类型之间生物膜形成的显著差异。值得注意的是,ST7 菌株的生物膜形成明显强于 ST59 菌株、ST188 菌株、ST398 菌株、ST5 菌株和 ST239 菌株。ST188 菌株的生物膜形成能力明显强于 ST398 菌株和 ST5 菌株。

图 1D 所示,与 t437、t189、t9353、t1250 和其他 SPA 类型相比,t091 分离株的生物膜生成能力显著高于 t437。


▲图 1 金黄色葡萄球菌的生物膜形成能力。(A) 生物膜类别。(B)MRSA 和 MSSA 分离株的生物膜形成能力的比较。(C) 不同序列类型的生物膜形成能力的比较。(D)spa 类型的生物膜形成能力的比较。***P < 0.001.

生物膜相关基因分布分析结果如下表所示,所有分离株的 icaA、icad 和 clfA 检测均呈阳性。在不同序列类型的金黄色葡萄球菌分离物中存在生物膜相关基因的差异。

▼表 3 主要克隆的生物膜相关基因携带情况分析


在基因表达水平分析中,研究发现 ST7 分离株的 icaA 表达水平明显高于 ST59、ST188 和 ST398 分离株,如下图 2 所示。这些发现与 ST7 分离株中观察到的强生物膜形成特性相一致。


▲图 2 以金黄色葡萄球菌 N315 icaA 的表达水平为对照 (相对表达量 = 1),以 gyrB 为内参基因。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。

讨论


本研究确定侵袭性金黄色葡萄球菌主要为 ST59-t437 和 ST7-t091 谱系。不同序列类型的分子特征、抗生素敏感性模式和生物被膜形成能力存在差异。具有生成强生物膜能力的 ST7 克隆的出现可能会使治疗大大复杂化。

这项研究为了解该地区侵袭性金黄色葡萄球菌的分子特征提供了有价值的见解。持续监测新出现的成功谱系,对于指导针对侵袭性金黄色葡萄球菌感染的感染控制策略至关重要。

文献来源:
Wang W, Zhong Q, Cheng K, Tan L, Huang X. Molecular Characteristics, Antimicrobial Susceptibility, Biofilm-Forming Ability of Clinically Invasive Staphylococcus aureus Isolates. Infect Drug Resist. 2023 Dec 18;16:7671-7681. doi: 10.2147/IDR.S441989. Erratum in: Infect Drug Resist. 2024 Jan 27;17:341-342. PMID: 38144224; PMCID: PMC10743705.

题图:https://ianrnews.unl.edu/5729.png


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