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背景
遗传性血小板减少症(IT)是一组异质性疾病，其特征是血小板计数减少，可能与其他临床表现有关。到目前为止，已有40多个基因被描述与IT相关。其中， α-肌动蛋白-1(ACTNI)基因突变，编码一种保守和普遍存在的F-肌动蛋白结合和交联蛋白(α-actin)导致非综合征性血小板疾病，称为ACTNI相关血小板减少症(ACTNI-RT;在线人类孟德尔遗传:615193)。
迄今为止，ACTNI的变异谱包括在整个基因中大约分布50个杂合突变。ACTNI-RT被描述为一种常染色体显性遗传的良性IT，其特征为轻度或甚至无血小板减少、异常大的血小板、轻微的出血倾向，且无额外的血液学或血管外表型。该研究描述了由ACTN1基因纯合突变引起的受ACTN1-RT影响的两名患者。
方法
家庭成员的调查是在ltaly都灵的Regina Margherita儿童医院和意大利帕维亚的IRCCS policlinico SanMatteo基金会进行的。
使用华大基因外显子组富集试剂盒，通过全外显子组测序(WES)进行突变筛查。对WES数据进行了SNVs、Indels和CNVs的检测，并对WES数据进行了进一步的处理，利用AUDACITY进行纯合性映射，并利用VCFTools计算了基于SNP的近交系系数。进行Sanger测序以确认所选突变的存在并进行分离分析。
野生型ACTNI全长cDNA及其突变(c.982G>A, p.Val328Met)如所述。在U2OS细胞中进行免疫荧光研究，进行了一个完善的功能分析，以用于评估ACTNI突变型的致病性。
结果
表1.报告的家庭成员的主要临床表现
补充图1. 报告的家庭成员血小板的代表性图像，在外周血涂片检查中观察到(May-Grünwald-Giemsa染色)。
在纯合子状态下，II-1和ll-2携带c.982G>A ACTN1突变，而他们的亲属I-1、I-2和II-3在杂合子状态下携带相同的突变。健康对照者(HC)的血小板为对照。纯合子者血小板巨噬细胞明显增多，杂合子个体血小板巨噬细胞增多程度较低。标尺对应于5微米。
补充图2. 报道的家族成员中主要血小板膜糖蛋白(GP)的表达。
数据表示为平均荧光强度(MFI)测量的每一个糖蛋白(相应的抗体克隆表示在括号内)，这是标准化的针对MFI的GPllb(CD41)，以考虑血小板的大小。杂合子的三个家族成员(I-1，I-2和II-3：条纹条) 三名健康对照者(白条)；II-1和II-2纯合子的两名患者显示(分别为灰色和黑色条)。总体而言，分析的GP在两个纯合子个体中的表达与他们的杂合子亲属和健康对照相似。根据已报道的方法进行流式细胞仪测定。
补充图3. 二尖瓣脱垂和/或二尖瓣关闭不全相关候选基因变异的标本家系关系。
“+”和“-”分别表示野生型和突变型等位基因。黑圈是二尖瓣缺损的个体。
图1. ACTN1 c.982G>A, p.Val328Met突变的遗传分析
(A) ACTN1 c.982G基因突变家系图谱，其中黑色箭头表示先证者，符号“+”和“-”分别表示野生型(WT)和突变型等位基因。对应每个家庭成员的临床特征。
(B)经Sanger测序证实的家族成员突变的峰图。纯合子用粗体表示。
(C)U2OS细胞过度表达WT(上图)或突变体(Val328Met，下图)myc-ACTN1和F-肌动蛋白分别用抗c-myc(9e10)抗体和Alexa Fluor594结合鬼笔环肽进行染色。图像是共聚焦免疫荧光图像的三个不同的实验。标尺对应20微米。
结论
ACTN1相关性血小板减少症是由ACTN1基因杂合突变引起的一种罕见疾病，以巨大血小板减少和轻度出血倾向为特征。
该研究首次描述了由ACTN1纯合子突变引起的ACTN1-RT影响的两名患者。(c.982G>A)轻度心脏瓣膜缺陷，WES所调查的任何其他基因变异都无法解释。在已报道的家族中，纯合子姐妹有中度血小板减少症和显著的血小板巨大症，与其杂合子亲属相比，揭示了更严重的血液表型，并突出了等位基因负荷对血小板大小的显著影响。该研究还发现一些ACTN1突变尤其是纯合状态，可能更容易产生心脏功能异常。
参考文献
Zanchetta ME, Barozzi S, Isidori F, et al. ACTN1-related thrombocytopenia: Homozygosity for an ACTN1 variant results in a more severe phenotype. Br J Haematol. Published online April 9, 2024.
感谢浙江省人民医院输血科来稿
公众号｜输血人
本期编译｜杜垚强，陈秉宇
