背
景
已致敏的孕妇若已从Kell血型系统 (ISBT 006) 中鉴定出针对 K 抗原的抗 K 抗体，则其胎儿和新生儿面临胎儿和新生儿溶血病（HDFN）的危险。采用无创产前基因检测(NIPT)对胎儿K抗原进行鉴定，对妊娠管理具有重要意义。数字和液滴数字PCR技术可以检测胎儿单核苷酸变异，这具有比实时聚合酶链反应(PCR)更高的特异性和敏感性。
本研究的目的是评估和比较胎儿KEL*01.01基因分型的不同检测方法和数字PCR方法。评估和比较从检测到抗K抗体的孕妇血浆标本中检测胎儿KEL*01.01等位基因的数字PCR方法。研究者测试了不同的数字PCR平台：Droplet Digital PCR™和QuantStudio™3D与不同的KEL*01.01分析相结合。
方
法
研究者使用自制和定制的KEL*01.01/ KEL*02检测试剂盒，使用Droplet Digital™和QuantStudio™3D检测试剂盒从59名孕妇（9-39周，49例抗k）中提取的DNA。使用数字和液滴数字PCRs将结果与胎儿/新生儿基因型/表型进行比较，并进行数字 PCR 数据解读和分析。
结
果
表 1 三种不同数字聚合酶链式反应 (PCR) 方案的胎儿 KEL*01.01结果
表2使用三种不同的数字聚合酶链反应（PCR）方案获得的KEL*01.01/02结果比较
图1 22例胎儿KEL*01.01分数（读数）的比较
III方案：液滴数字™采用自定义KEL*01.01/KEL*02检测)；I方案：液滴数字™采用自制KEL*01.01/KEL*02检测
图2 36例采用不同检测方案检测的胎儿KEL*01.01基因片段(读数)的比较
III方案：Droplet Digital™(ddPCR)与自定义检测；II方案：QuantStudio™3D (dPCR)与自制检测
结
论
这项研究表明，独立应用的dPCR和ddPCR方法以及KEL*01.01测定，其胎儿KEL*01.01基因型的结果是可靠的，并规避了实时PCR的非特异性限制。
研究者的胎儿 KEL*01.01 基因分型结果扩展了对数字 PCR方案有用性的认识，并表明基于数字方法的无创产前检测，将在标准分子实验室中以低成本改善胎儿与母体抗原不相容性的产前管理，并常规使用实时技术BGA和胎儿标志物的PCR检测。
参
文
考
献
Agnieszka Orzińska, Magdalena Krzemienowska, Sylwia Purchla-Szepioła, Izabella Kopeć, Katarzyna Guz. Noninvasive diagnostics of fetal KEL*01.01 allele from maternal plasma of immunized women using digital PCR protocols. Transfusion,2022;62(4):863-870.
公众号
公众号｜输血人
本期编译｜赵丽 马现君
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