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摘要
利妥昔单抗（RTX）及其他可直接与恶性细胞结合的单克隆抗体（mAbs）的研究具有重要的临床价值，然而其并非对所有患者都有效。RTX 的主要作用机制是由 NK 细胞介导的抗体依赖性细胞毒性（ADCC）作用。作者之前的体外研究表明，T 细胞有助于抗 CD20 靶标 B 细胞激活的 NK 细胞的活力和细胞毒性潜能的维持。
该研究使用一种新型小鼠模型和临床相关分析来评估 T 细胞是否有助于体内肿瘤微环境 (TME) 中 RTX 介导的 NK 细胞 ADCC 作用。利用 Raji 淋巴瘤细胞和正常外周血单核细胞建立了人源化小鼠模型。该模型可控制淋巴瘤 TME 中的 T 细胞数量。在该模型中，经 RTX 治疗后，NK 细胞的活力、CD16 和 CD25 的表达均下降，然而在 T 细胞存在的情况下则会增加。结果表明有T细胞存在时，RTX 疗法更有效，而NK细胞被耗尽时，RTX 疗法则无效。另外在惰性淋巴瘤患者中，接受 RTX 治疗前和治疗后约一周采集细针抽吸物，治疗前 TME 中的 CD4+T 细胞和 T 细胞总数与 NK 细胞 CD16 和 CD25 的增加有很强的相关性，NK 细胞 CD16 和 CD25 的表达在 RTX 治疗后有所增加。
因此该研究得出结论，T 细胞在 TME 中有助于增强 RTX 介导的 NK 细胞活力和 ADCC 作用。
方法
肿瘤微环境中的T细胞有助于增强利妥昔单抗介导的NK细胞活力、CD16和CD25的表达以及抗肿瘤效应。
方法
小鼠模型：新型人源化小鼠模型可控制瘤内 T 细胞数量，以研究 T 细胞对 NK 细胞介导的 ADCC 的影响。
相关临床研究：利妥昔单抗治疗前和治疗后，从惰性淋巴瘤患者身上采集细针穿刺液。
分析：使用流式细胞术量化治疗前的 T 细胞，并评估治疗后临床小鼠模型和相关临床研究中 NK 细胞的变化。
重点技术：
1、人源化小鼠模型的建立
2、在人源化小鼠模型中评估 TME 中改变的 T 细胞数量对 NK 细胞表型的影响
人源化小鼠模型中将 PBMC 分成两个等分。从一个等分样品中清除 T 细胞，再从另一个等分样品中分离 T 细胞。制成含有1×106个Raji细胞和5×105个Raji细胞的细胞混合物，将来自同一来源的不同数量的 CD3+T 细胞(0%、5% 和 20%)加入到 T 细胞耗尽的 PBMC 中。因此，接种物中 Raji 细胞和非T PBMC 数量不变，但T细胞数量不同，分别为 0% T细胞(无T细胞/鼠)、5% T细胞(2.5×104 T细胞/鼠)或 20% T细胞(1×105 T细胞/小鼠)，将这种混合物接种到 NCG 小鼠腹部。利妥昔单抗（Rituximab，RTX）和曲妥珠单抗（Trastuzumab，TRA）从霍尔登综合癌症中心的废弃临床药瓶中获得。一旦可以触摸到肿瘤（第 20 天），小鼠腹腔注射30mg/Kg单抗，其中包括 RTX 和 TRA 单抗。单抗治疗4天后获得治疗后FANs。
结果
图1.新发肿瘤的 TME 中 T 细胞和 NK 细胞分布均匀
图2.调整接种体中的T细胞数量会导致新发肿瘤中的T细胞数量不同，但不会对恶性细胞或NK细胞的比例产生可观测到的影响
图3.人源化小鼠模型中，治疗前TME中的T细胞的存在可提高NK细胞的活力、CD16 和 CD25 的表达
图4.瘤内T细胞可增强NK细胞介导的RTX疗效
图5.相关临床试验结果中，治疗前TME中的CD4+T 细胞与 RTX 治疗后 NK 细胞 CD16 和 CD25的表达增加具有相关性
结论
二十多年来，直接与恶性细胞结合的单抗（包括 RTX）一直是癌症治疗的主要手段。然而，我们对这类单抗治疗的反应性或抗药性机制的了解仍不全。
研究者曾报道过的体外研究表明，T 细胞通过维持 NK 细胞的活力和增强 NK 细胞介导的 ADCC 来促进 RTX（和其他单抗）的疗效。然而，体外培养与体内条件有多方面的差异，包括但不限于缺乏 TME 结构、缺乏基质细胞及新陈代谢环境差异。体外共同培养的细胞系和免疫效应因子来自不同的供体，因此增加了潜在的混淆因素。因此，研究者认为这些 T 细胞对 RTX 介导的 NK 细胞 ADCC 的影响的体外研究都是假设性的。因此，研究者通过动物模型和临床研究分析，评估了 T 细胞在 RTX 介导的 ADCC 中的作用。结果为之前的假设提供了进一步的证据。
文中所展示的使用新型小鼠模型的数据和临床样本的相关结果证明 TME 中的 T 细胞有助于增强 RTX 介导的 NK 细胞活力和体内 ADCC 作用。这为了解治疗耐药性的另一种潜在机制提供了新视角及新的治疗方案。
参考文献
Arora J, Ayyappan S, Yin C, et al. T-cell help in the tumor microenvironment enhances rituximab-mediated NK-cell ADCC. Blood. 2024;143(18):1816-1824.
感谢浙江省人民医院输血科来稿
输
血
本期编译｜朱佳男 陈秉宇
