经过多年在研发与注册上积累沉淀，2022年10月迈景基因自主研发生产的国内首个肺癌PCR多基因伴随诊断试剂盒（商品名：迈菲捷®）获得NMPA批准上市；2024年1月，迈景基因在肿瘤精准诊断布局中的又一里程碑——肠癌伴随诊断产品（商品名：迈常捷®），获得NMPA批准上市，再次证明迈景基因在分子诊断领域的领先地位。那么，PCR技术在肿瘤分子病理检测临床应用中，需要关注哪些问题？使用过程中问题应该如何处理？
本期迈快一步，小编就与各位小伙伴一起学习一下，2023年11月发表于《中国肿瘤杂志》的《基于实时荧光定量PCR技术的肿瘤分子病理检测临床实践中国专家共识(2023版)》
新冠疫情之后，实时荧光定量PCR技术成为应用最为广泛，市场占有率最高的分子检测技术。实时荧光定量PCR技术在肿瘤分子病理检测中的应用受到广泛认可，具有操作简便、报告周期短、灵敏度高、结果判读标准化等优点。但在临床实践中，PCR技术的性能验证、质量管理、异常结果处理等问题相对复杂，缺乏统一规范和标准，本指南针对PCR技术在肿瘤分子病理检测临床实践中规范化与标准化进行指导。
目前肿瘤分子病理检测常用样本主要包括福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE）样本（包括手术切除和活检组织样本）、细胞学样本和体液样本(包括外周血、脑脊液、浆膜腔积液上清液、唾液和尿液等)。
从指南可见，使用手术切除组织或活检组织FFPE样本推荐级别是强烈推荐。从NSCLC临床应用场景上看，基于PCR技术的产品，更多在初诊早期需要进行辅助治疗或者中晚期初诊急需要进行靶向治疗的患者。检测样本以手术切除组织或活检组织FFPE样本为主。组织样本不可及时，推荐细胞学样本作为补充，强烈推荐将细胞学样本制备成细胞蜡块。
若组织和细胞学样本均不可及，推荐外周血等体液样本进行循环肿瘤DNA突变检测。从临床应用来看，组织和细胞学样本均不可及的情况下，多为中晚期或者多线治疗后的患者，在选择检测方案时，更多推荐进行NGS大panel全方位的检测方案来寻找最大的治疗可能性。
样本质量评估
推荐使用2年以内的FFPE样本，病理医师须对肿瘤细胞含量进行评估，推荐采用肿瘤细胞不少于200个，且占比不少于20%的蜡块。石蜡切片和蜡卷可室温运输或短暂保存，推荐保存时间不超过2周。从迈菲捷®真实世界检测数据中得出，2年以内的FFPE样本均能稳定的检出，同时也发现部分单位检测出现问题源于陈旧石蜡切片，也就是石蜡切片或者蜡卷不适合长期保存。因此在进行分子检测时建议是新切的白片或者蜡卷。
样本获取、富集、运输与保存
FFPE样本切片前应保证切片机擦拭洁净无污染物，切片时每个样本使用单独的一次性刀片、一次性镊子和棉签等耗材，防止不同样本间交叉污染。
规范的样本切片可以避免大部分的污染事件的发生。只有具备PCR扩增实验室资质才能开展PCR技术相关的项目，实验室、设备、试剂、人员的规范管理，极大降低了污染发生的可能性。从落地开展PCR项目中发生污染事件复盘分析时发现，与以往分子生物学实验常见污染因素不同，操作切片时没有使用单独的一次性刀片、一次性镊子和棉签等耗材，引起不同样本间交叉污染的概率最高。
检测流程中试剂合规化
指南明确推荐，核酸提取采用经国家药品监督管理局（NMPA）注册/备案的商品化试剂盒，若采用实验室自建试剂或其他核酸提取试剂，应进行性能验证，以确保能够达到临床应用要求。PCR检测与结果分析强烈推荐采用经NMPA注册/备案的商品化试剂盒进行检测。自从2018年NMPA实施新版伴随诊断试剂注册审查指导原则之后，获批的具有伴随诊断功能的试剂较少，而2023年迈景基因自主研发生产迈菲捷®，是国内首个肺癌PCR多基因伴随诊断产品。
注重检测试剂的性能指标
指南指出为保证实验室的规范运行以及PCR实验结果的准确可靠，应进行室内质控、室间质评和室间比对等，并对质量进行持续改进。进行性能验证时，推荐根据试剂盒说明书和检测项目实际情况，适当简化方案，侧重验证对检测结果有重要影响的性能指标，主要包括但不限于准确度、检出限、精密度、交叉反应和抗干扰能力等。
准确度高和灵敏度高是PCR技术的检测优势，由于PCR检测只能用于检测已知位点，选择试剂时关注肿瘤突变检测涵盖常见突变位点。精密度的高低决定试剂盒在运输、保存、不同生产批次的稳定性。而交叉反应反映出生产商研发团队在设计扩增区间、引物和反应体系优化的技术实力。在临床落地过程开展预实验时，考虑样本稀缺与成本，一般采用简化方案的性能验证。
强烈推荐实验流程逐步逐项进行问题排查
检测结果会受到多环节、多方面因素的影响，异常结果强烈推荐根据实验记录及SOP对实验流程进行逐步逐项的问题排查。排除常见因素及污染因素后仍然异常，可换用引物/探针位点设计不同的PCR试剂盒或借助其他技术平台进行验证。可见，临床单位落地共存多个技术产品或者第二家检测产品，更利于实验室的稳步运行。
PCR技术检测产品适合NSCLC
患者临床一线快速诊疗需求
指南强烈推荐PCR技术应用于肿瘤分子病理诊断具有高灵敏度和高特异度、操作便捷和闭管检测等优势，适用于对已知的基因点突变、短插入和缺失突变、已知的基因融合变异进行检测。这些基因并不像BRCA1/2无明确热点突变，而是有明确的突变热点适合PCR技术设计成满足临床需求的多联检产品，如肺癌伴随诊断相关基因。
“菲”“常”组合
“菲”“常”组合之肺癌伴随诊断试剂盒——商品名:迈菲捷®，正是借助PCR技术检测优势设计而来，是国内首个肺癌PCR多基因伴随诊断试剂盒，覆盖指南以及共识推荐肺癌必检基因包括EGFR、ALK、ROS1、KRAS等。相比单基因PCR检测方法，一次可检测指南推荐的所有基因，能更好的为医生诊疗提供指导。该产品与NGS相比，检测速度快，技术成熟，适合医院落地检测。与市场同类检测产品相比，判断更客观，产品设计及临床预期用途定位更清晰，以临床需求为设计核心，其中KRAS G12C可直接分型，且包含NTRK1/2/3融合检测，满足临床最新检测需求。
“菲”“常”组合之肠癌伴随诊断产品——商品名：迈常捷®，本试剂盒用于体外定性检测结直肠癌患者包括KRAS基因在内的驱动基因突变。作为具有伴随诊断功能的基因检测试剂盒，可辅助临床医生判断患者使用西妥昔单抗注射液的获益情况。该产品覆盖了结直肠癌诊疗指南要求的包括KRAS基因在内多个核心基因，并进行了充分的靶向药物伴随诊断功能临床有效性验证，该产品兼具操作简单、易于开展、报告时间短等优势，可以有效满足结直肠患者快速伴随诊断的临床需求。
联系我们
检测服务：400 839 0166
商务合作：18122435272(接听时间09:00-17:00)
邮箱：market@maijinggene.com
地址：广州国际生物岛螺旋四路9号C101单元
迈景基因
迈景基因成立于2015年，总部位于广州国际生物岛。自成立以来，一直秉承 “以客户需求为导向”的服务理念，长期深耕PCR+NGS双技术平台，致力于 为肿瘤患者提供精准医学领域整体解决方案。
迈景基因自主研发Myseq™单边链特异多重PCR等多项独创技术，获得肿瘤基 因检测领域的国家发明专利十余项，实验室获得广东省临检中心颁发的“高 通量测序实验室”技术审核认可，同时获得美国CAP等实验室质量体系认证。
2022年10月26日，迈景基因研发生产的国内首个肺癌PCR多基因伴随诊断试剂盒(商品名：迈菲捷®)获得国家药品监督管理局(NMPA)批准上市(国械注准20223401432)；2024年1月23日，研发生产的结直肠癌伴随诊断快速检测 试剂盒(商品名：迈常捷®)获批上市(国械注准20243400145)，肺肠两款伴随诊断试剂盒助推医院院内方便快捷合规地开展肿瘤基因检测项目，惠及更多的肿瘤患者。
未来，迈景基因将深度布局IVD方向，同时推进PCR和NGS双技术平台的肿瘤产品研发，以优质的肿瘤IVD检测产品和高效的医学检验服务两种商业模式，助推肿瘤精准医学的发展，为癌症患者提供更好的精准医学服务。
