2022年10月，明尼苏达大学Daniel F. Voytas团队在Nature Protocols上在线发表了一篇题为“Direct delivery and fast-treated Agrobacterium co-culture (Fast-TrACC) plant transformation methods for Nicotiana benthamiana”的研究论文，该研究提供了两种诱导烟草分生组织的方法，与标准方法相比，这些方法更便宜、技术难度更小、所需时间更少，这两种方法为生成新型植物种质提供了替代方法。
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在此，作者描述了两种基于农杆菌的方法，用于对无菌生长或土壤生长的本塞姆氏烟草植物进行遗传修饰。使用发育调节因子（DR），即影响细胞分裂和分化的基因产物，来诱导新生分生组织。一种方法是快速处理农杆菌共培养(Fast-TrACC)法，可将DR输送至无菌生长的幼苗，诱导产生芽并最终产生整个植物的分生组织。另一种方法是直接递送(DD)法，将DR递送至现有分生组织已被移除的土壤生长植物，接着DR促进伤口部位新芽的形成。这两种方法为生成新型植物种质提供了替代方法，与标准方法相比，这些方法更便宜、技术难度更小、所需时间更少。对于DD和Fast-TrACC法，从转移DNA(T-DNA)到编辑植物恢复的整个过程都可以在约70天内完成。
图3.DD法的时间表。
2、快速处理农杆菌共培养(Fast-TrACC)法
Fast-TrACC法是一种可扩展的方法，可以快速实施且植物生长空间需求小，这使快速测试变量以优化不同植物物种中的基因传递和分生组织诱导成为可能。这些变量包括但不限于用于DR递送的农杆菌菌株类型、建立再生能力的DR组合、增强功能的R编码序列的修饰以及使用不同的启动子来调节DR表达。虽然通过Fast-TrACC法得到编辑的再生植物需要大约70天，但在载体组装并转化到农杆菌中后，对分生组织诱导的不同变量的评估仅需要大约20天。
具体实验步骤：烟草幼苗在无菌六孔板中发芽后，一旦子叶出现，就除去液体培养基并用农杆菌替换，共培养2天后，用水冲洗幼苗，并将单个幼苗转移至12孔板的孔中。大约20天后，幼苗上开始形成绿色愈伤组织（白色箭头）。这些生长可以留在幼苗上或移除并转移到固体1/2 MS培养基上刺激芽的发育，后转移至生根培养基促进根形成，最后将生根的植株移到土中进一步生长。
图4.Fast-TrACC法实验步骤。
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