大家都知道了：2023年2月底，网上突然爆出一个惊天大瓜，就是大虎送检了几种油橄榄精华，发现热卖的C**油橄榄精华中没有检出油橄榄叶提取物的标志性成分——橄榄苦苷和羟基酪醇。
此事引起了轩然大波，我也于2月28日写了文章讨论出现这种情况的一些可能性（回顾见：What，油橄榄塌房了？）
但是这些讨论只是依据技术性常识的分析和推测，并不能确认该油橄榄精华是不是真的不含油橄榄叶提取物。
为了获得确切的结论，我决定组织一次检测，随后联系了一位朋友，也是一位资深的色谱专家骆工讨论检测方案。
骆工就职于制药行业TOP10外企，在色谱分析方面钻研很深，各种色谱仪器的原理、操作熟稔于心。虽然我也修过色谱课程并操作过多种色谱仪器，但比起他这种整天和色谱分析打交道的行家来说还是差得太远了。
骆工提供了英国药典、美国药典、欧盟药典中有关油橄榄叶提取物的分析标准及国内的团标等文献作为分析参考，我也进行了文献检索，讨论下来，最终决定分别在两家实验室进行测试。其中一家位于广东，一家位于上海，采用不同的仪器和方法分别测试，以便彼此印证。
旋即，我们从C**官方旗舰店购买了该款产品，未经拆封，直接寄送到相关实验室。
图1 官网购买记录
实验室收到时包装完好，瓶体完整。
图2 送检时瓶体完好无损
然后，我们又从可靠的渠道购买了羟基酪醇和橄榄苦苷的标准样品寄送到实验室。
图3 购买羟基酪醇和橄榄苦苷的标准样品记录
下面向大家报告检测的结果。
一、广东实验室检测的情况
参考潘丽静等[1]的研究进行了样品的前处理（也就是把产品中的橄榄苦苷提取出来形成能上机检测的样品）。方法如下：
准确称取0.5g（精确至0.0005g）试样，置于25 ml棕色容量瓶中，加入50%甲醇溶液定容至25 ml中，超声提取20min，取上层清液经0.22μm针式水相滤膜过滤至棕色进样小瓶中，供LC-orbitrap检测。
使用50%甲醇溶液提取，是因为橄榄苦苷和羟基酪醇均溶于醇，潘丽静等[1]在研究中确认用50%甲醇溶液可以良好提取样品中的橄榄苦苷，确认该方法的回收率和重现性良好。
广东的实验室采用的仪器是液相色谱-高分辨静电场轨道阱质谱仪（LC-Orbitrap Vanquish＆QE-Orbitrap），以进行定性测试。这种超高分辨液质联用仪比传统QTOF分辨率高2-3倍，是非常精密的。
色谱条件如下👇🏻
色谱柱：Thermofisher Hypersil Gold C18（150*2.1mm,1.9um -Micron），柱温30℃，流速0.3mL/min，进样量2μL；
流动相：甲醇-（0.1%）甲酸水溶液（40∶60），等度洗脱0～5.0min。
质谱条件如下👇🏻
采用ESI负离子模式，Full scan扫描，扫描范围（50M/Z-750M/Z），干燥器气体温度：300 ℃，干燥器气体流量7.0 L/min，雾化气压力35 psi，鞘气温度350℃，鞘气流速11.0 L/min，毛细管电压4000V，喷嘴电压1500V。
检测结果是👇🏻
通过Compound Discover和MassFrontier联合搜库和结构解析
未在样品中检测到
羟基酪醇和橄榄苦苷
广东实验室测试的谱图和解析结果如下：
图4 广东实验室测试的谱图和解析结果
二、上海本地实验室的检测情况
上海本地实验室同时进行了定性和定量检测。橄榄苦苷的检测方法参考文献[1]；羟基酪醇的检测方法参考文献[2]。
2.1 橄榄苦苷的含量测定：
仪器：UPLC-MS/MS（AB5500）。
色谱条件：色谱柱：C18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇+（ 0.1 mol/L） 甲酸水溶液=（40+60）；流速：0.3 mL/min；进样量：2 μ；柱温 30 ℃；
质谱条件：离子源：ESI；模式：多反应监测扫描（ MRM）；橄榄苦苷定量定性监测离子：539.2/275.1；539.2/307.0。
标准溶液：准确称取橄榄苦苷标准品10 mg（精确至0.1 mg），用 50%甲醇溶液溶解并定容至刻度10mL，逐级梯度稀释以制作标准曲线，现配现用。
图5 橄榄苦苷LC-MS/MS测试标准曲线，
曲线很漂亮，表明测试很稳定
再来看标准品溶液的谱图：
图6 橄榄苦苷标准品溶液的LC-MS/MS测试谱图：可见橄榄苦苷上机检测时，出峰（保留）时间是1.852min-1.854min处。
测试样品准备：准确称取约 0.1 g（ 精确至 0.000 1 g）样品（即C**油橄榄精华），置于25 mL比色管中，加入50%甲醇溶液定容至25 mL 中，超声提取20 min，取上层清液经 0.22 μm针式水相滤膜过滤至棕色进样小瓶中，上机测试。
由下面的谱图可见👇🏻
未在该样品中检测到橄榄苦苷。
图7 C**样品的LC-MS/MS测试谱图：
可见并未在1.852或1.854min处看到有相应的峰
2.2 羟基酪醇的含量测定
测试方法：HPLC（Vanquish）
色谱条件、标准曲线准备等就不啰嗦了，测试结果是：
未在该样品中检测到羟基酪醇。
来看测试谱图👇🏻
图8 羟基酪醇标准品的 HPLC 测试图：
羟基酪醇的出峰时间是9.615min
图9 样品的 HPLC 测试谱图：
请注意，9.615min处没有峰，表示没有羟基酪醇
三、总结
为确认C**油橄榄精华中是否含有油橄榄叶提取物中的代表性成分（橄榄苦苷和羟基酪醇），我们联系广东和上海本地实验室，采用定性和定量方法进行了平行测试。
测试结果显示：C**油橄榄精华中未检测到橄榄苦苷和羟基酪醇。本次检测的结果与大虎的检测结果相一致。
看到这个结果，冰哥直接给整无语了。怎么说呢？以前，配方师界有个段子，嘲笑有些企业为了节省成本，象征性添加功效成分，就像“在太平洋里打个蛋花儿”。这次，C**油橄榄（划掉）精华，竟然，太平洋这么大，可它连个蛋花儿都没有！真的，就很离谱。
咱就说，一个主打舒缓功能的产品，确实可以不依赖油橄榄叶提取物实现功效目标，但是，这产品的名字就叫“supreme olive serum（超级橄榄精华液）”啊！行，老婆饼里面确实可以没有老婆，但架不住化妆品得有成分表，这个产品的成分表第二位就是油橄榄叶提取物……这老婆饼的例子就没有参考意义了。
图10 C**精华瓶身成分表
话说，即使该产品用的是油橄榄叶水提取物（水提无法确实得到橄榄苦苷），里面至少也应该有那么一丁点儿羟基酪醇的影子。这一点影子都没有，该如何解释呢？
这个问题，很多人都想不明白。因为油橄榄叶是油橄榄产业的副产物，它的提取物并不贵，又不存在舍不得加、加不起的问题。
十年前我做配方的时候，就用过油橄榄叶提取物。那个气味我很熟悉，一闻就知道，肤感也是有点特别的。用这个原料在配方工艺中毫无困难，很好配伍，何以至此呢？
其中的原因，可能还需要各方去调查，但有一点是肯定的：化妆品备案，品牌提交的资料应当真实。虽然说药监对备案资料不一定会去核实，但不管查不查，品牌对于备案资料的真实性是负有法律责任的。
这么看，今后达人们接商务合作的时候，估计又不得不再多考虑一些因素了。品牌这么个搞法，是对业界信任链的破坏，对消费者的欺负，也是对法规的无视。
大家有什么话评论说吧，反正冰哥是已经无语了~~~~真~~就~TM~唉!！！
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参考文献：
[1] 潘丽静,陈韦韦,袁旻嘉.超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定化妆品中橄榄苦苷[J].日用化学品科学,2023,46(07):22-26.
[2] Smeriglio A, Giovinazzo C, Trombetta D. Development and validation of RP-HPLC-DAD method to quantify hydroxytyrosol content in a semi-solid pharmaceutical formulation[J]. Med chem, 2015, 5: 442-446.
作者简介：
理性护肤运动发起人，同济大学皮肤学博士，英语高级口译译员，创办中国第一个私人非盈利性皮肤学实验室，专注于美容皮肤学、皮肤和化妆品的关系研究。
著作：《素颜女神：听肌肤的话》、《享瘦之门》、《听肌肤的话2：问题肌肤护理全书》；
译作：《药妆品》(Cosmeceuticals)第3版、《防晒与光防护临床指南》、《美国皮肤学会痤疮治疗和护理指南(2016版)》，《瘙痒》中文第2版；
第一作者论文发表于Experimental Dermatology、Journal of Cosmetic and Laser Therapy、Dermatology、Skin Research & Technology、《临床皮肤科杂志》、《中国皮肤性病学杂志》、《中国美容医学》、《中华皮肤科杂志》等。
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