点击蓝色文字关注我们吧！
分享细胞学知识专注形态学发展。
君安医学细胞平台，等你来共同探索。
作者：庞冲敏
贵阳市公共卫生救治中心
一.审报告，生疑惑
白细胞、血小板在参考范围内，单核、嗜碱性粒细胞稍高，淋巴细胞偏低,中度贫血。从本结果看，除中度贫血外似乎无太大异常？
患者男性，35岁，没有历史结果可比对。
室内质控在控，可以通过审核吗？
根据国际血液学复检专家组推荐的41条复检规则，首次HGB<70g/L，需复检！复检前，查看一下仪器的报警提示。
仪器上的报警提示
WBC与PLT值虽然正常，但WBC散点图与PLT直方图异常，且有核红细胞，幼稚粒细胞，有原始细胞/异常淋巴细胞，左移等提示。触犯6条复检规则，似乎不简单！
因常规电阻抗法（PLT-I）显示血小板直方图异常，故改用荧光法（PLT-F）检测PLT，提示血小板凝集。
PLT检测值：从144×109/L下降到94×109/L。PLT真实值是多少？
根据第四版操作规程进行PLT手工计数，手工计数PLT:30.00 ×109/L。
PLT:144→94→30。推片复检，患者血片少见PLT，可见有核红细胞。
除血细胞外，还可见一个紫红色小点，又一个紫红色似腊肠样小点，两个紫红色小点，这些紫红色小点，是什么？真菌吗？在细胞外，是污染的？还是感染的病原菌？
01
片尾：发现细胞内与破碎的细胞周围有大量椭圆形菌体，核位于一端，浆浅蓝色，菌体中间有明显白色的纵隔，将菌体隔成一大一小，有的菌体较长。病原菌可能性大，形态似马尔尼菲篮状菌？
02
片尾：发现细胞内与破碎的细胞周围有大量椭圆形菌体，核位于一端，浆浅蓝色，菌体中间有明显白色的纵隔，将菌体隔成一大一小，有的菌体较长。病原菌可能性大，形态似马尔尼菲篮状菌？
二.走进临床，查找病因
男性 ，35岁,,因“反复发热2+月，胸闷、气促10+天”于2022年05月29日16:35入院，有不洁性行为史。
体格检查：T 39.2℃ P：150次/分 R：30次/分 BP：89/45mmHg SPO2：92%（吸氧2L/min）。
面部见坏死性丘疹，脐凹样皮疹。
马尔尼菲篮状菌感染多见于HIV感染，本患者是HIV感染吗？于是马上做一个HIV的斑点免疫胶体金快速实验。
HIV阳性
专家共识：马尔尼菲篮状菌感染好发于免疫力低下的艾滋病患者，即使在抗真菌治疗后仍有较高的病死率，马上打电话和临床医师沟通：
患者HIV快检阳性，PLT计数与外院结果相符，在血片中检出疑似马尔尼菲篮状菌形态，高度怀疑血性播散型马尔尼菲篮状菌感染，建议做HIV确诊及CD4+、CD8+试验及血液真菌培养。
化学发光法检测HIV，初筛待复检
免疫印迹试验检测HIV，确诊阳性
患者流式细胞学检查
患者艾滋病且免疫力低下！
血液培养
马铃薯葡萄糖琼脂培养产生玫瑰红色素，25℃呈菌丝相。
37℃呈酵母相
血液培养检出马尔尼菲篮状菌
乳酸酚棉蓝染色
光滑透明分枝分隔菌丝扫帚状枝
01
确诊为艾滋病合并播散型马尔尼菲篮状菌感染，虽然积极抗真菌治疗，但很不幸，患者还是于6月4日7:36分治疗无效死亡。
02
患者马尔尼菲篮状菌感染 ，PLT的假性增高是此菌干扰导致的吗？
03
分析检测方法，解除心中疑惑
三.分析方法解疑惑
3.1 PLT-I RBC/PLT通道
在RBC/PLT通道中，用鞘流电阻抗法（库尔特原理）计数红细胞和血小板。稀释后的血样从喷头的前端喷出，被鞘液包裹着的血细胞单个从小孔中央通过。
电阻信号计数代表血细胞计数
电阻信号的大小反映血细胞的体积信息
一般仪器在2~30fL范围内分析血小板。
正常血小板直方图呈 左偏态分布，血小板主要集中在2~15fL内。
马尔尼菲篮状菌直径2~8μm，正常PLT直径1.5~3μm，大PLT直径4~7μm，巨PLT直径>7μm,直径相近，说明此菌可引起PLT假性增高。
做实验验证一下！
用生理盐水作空白，PLT-I通道检测，全部为0
用接种环挑4环37℃培养后的马尔尼菲篮状菌于2ml生理盐水中，混匀后PLT-I通道检测,WBC，RBC，PLT均受到了干扰。
3.2 PLT-F
项目：PLT, IPF 荧光法
标志：PLT Abnormal scattergram,
PLT Clumps?
稀释剂：CELLPACK DFL
染色液：Fluorocell PLT
Fluorocell PLT主要对含核酸丰富的细胞内构造进行染色
小胞体（核糖体RNA）
线粒体（线粒体DNA）
对血小板特异性染色！
能排除马尔尼菲篮状菌的干扰吗？
做个实验验证一下！
用生理盐水作空白，PLT-F通道检测，全部为0
之前检测的马尔尼菲篮状菌混匀后，再用PLT-F通道检测,WBC，RBC，PLT同样受到了干扰。
FLT-F计数PLT,是利用荧光染色强度的不同进行区分，如果某种成分（如马尔尼菲篮状菌）的直径、所含核糖体RNA与线粒体DNA数量与PLT相近，其染色后荧光强度与PLT相似，位于PLF计数范围，可干扰PLT-F的计数！
3.3 流式细胞术
流式细胞术是目前PLT计数最先进的方法，其原理为利用CD61是血小板特异性表面标志物等多参数分析推算血小板的数量，因为马尔尼菲篮状菌无此标志物，可以排除干扰。
一周前院外PLT计数是什么方法呢？
追踪院外当时检测PLT的医院，了解到PLT值是电阻抗法检测的结果，血片复检与之相符，其余未见明显异常。
请他们寄当时血片来看看。镜检：PLT确实少见，全片在5个细胞内发现菌体。
如果当时外院就提示疑似马尔尼菲篮状菌感染，是否就能早发现，早治疗。
四.做总结获启示
37℃培养后的马尔尼菲篮状菌可能引起XN1000血球仪WBC，RBC和PLT假性增高，PLT-I及PLT-F方法都受干扰。
马尔尼菲篮状菌感染时，但若菌体繁殖未涨破细胞，不会干扰PLT检测。只有当细胞内菌体繁殖涨破细胞后，散在于细胞外，才可引起PLT的假性增高。
血细胞分析仪的使用提高了工作效率, 准确性高、重复性好。但仍只能作为一种过筛手段, 不能完全代替手工计数及显微镜对血细胞的识别。
作者简介
~end~
公众号平台稿件征集：细胞、细菌、结晶等形态相关医学专业类作品。[知识集锦][看图识细胞][病例分享]等内容不限，形式可参考往期公众号推文。
作品要求：内容真实，原创首发，视频图片高清，请勿一稿多投。
投稿邮箱：972260172@qq.com（标题为：作品名+作者姓名、单位、电话”）
往期回顾
姿势已摆好
就等你点啦
审核：夏万宝-上海交通大学医学院附属松江医院
编辑：赵梦鹤-杭州市中医院
责编：刘朝红-德阳市人民医院
