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知·之·病·理
01
原理
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众所周知，HPV持续感染会导致高度上皮内病变甚至是癌变，是由于持续感染过程中，病毒发生整合，破坏人体细胞的正常凋亡机制和生长周期。
图1.HPV整合状态。摘自《KOSS诊断细胞学及其组织病理学基础（第5版）》
原理
HPV整合时破坏了E2基因的开放阅读框 (ORF)，导致E2基因表达受抑，从而失去对HPV两个重要的癌基因E6和E7的表达调控。E6和E7癌蛋白能够调控细胞周期，其中p53和视网膜母细胞瘤抑制蛋白(pRB)最为重要。
图2.E6和E7蛋白对细胞周期的影响。摘自《KOSS诊断细胞学及其组织病理学基础（第5版）》
E6蛋白与p53作用，并因此降解，p53是在细胞周期G期控制 DNA 转录的关键调节性基因。E6可通过促进p53过早降解而抑制p53的功能，并能阻止和干抗细胞凋亡，使得宿主细胞凋亡失控。
而E7通过抑制pRB（视网膜母细胞瘤抑制蛋白）消除细胞周期阻滞(E7蛋白能降低视网膜母细胞瘤蛋白复合体的稳定性，使细胞逃避pRB通路调节的细胞周期调控）。E7是主要的转化蛋白，E7与视网膜母细胞瘤蛋白(pRB)竞争结合，释放转录因子E2F，E2F进而激活其靶细胞并加速细胞周期的进程，从而诱导细胞无限增生。
两种宿主细胞抑癌基因(p53，pRB)的“失活”增加了细胞恶性转化的可能性。E6和E7蛋白在HPV一过性感染过程中表达水平较低，在转化为癌前病变的一些未知的环节，E6和E7基因的表达增加，从而在上皮全层过度表达，抑制p53和pRB的功能，使得宿主细胞凋亡失控，诱导细胞无限增生，转向恶性。
02
免疫表达
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P16
P16基因是直接参与细胞周期调控的抑癌基因，正常细胞周期中pPB-E2F复合物对P16表达负反馈抑制。
图3.P16负反馈抑制。摘自余俐教授《p16/Ki-67双染在联合筛查时的最新研究进展》
而E7竞争性结合pRB后，破坏了P16的负反馈抑制，导致P16过表达，细胞异常增殖。
图4.P16过表达，细胞异常增殖。摘自余俐教授《p16/Ki-67双染在联合筛查时的最新研究进展》
Ki-67
增值性核抗原，在正常宫颈上皮中，Ki-67通常仅表达基底层和复基底层。当宫颈发生病变时，Ki-67表达逐渐向中层和表层延伸。
双染中：
Ki67：核呈红色。
P16：胞浆与核同时着棕黄色。
图5.双染表达及着色。摘自余俐教授《p16/Ki-67双染在联合筛查时的最新研究进展》
03
双染意义
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双染
P16和Ki-67共表达于一个细胞，提示细胞周期失调。
阳性--提示CIN2＋病变，需阴道镜检查。
阴性--可随访，一年后复查。
（P16/Ki-67双染可用于HPV阴性但细胞学ASCUS和除16/18型以外的高危型HPV检测阳性而细胞学阴性的分流）
参考文献：
1.中山大学附属第一医院余俐教授讲座《p16/Ki-67双染在联合筛查时的最新研究进展》
2.LEOPOLD G. KOSS,MYRON R. MELAMED《KOSS诊断细胞学及其组织病理学基础（第5版）》
Pathology of knowledge
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