点击
蓝字关注我们~
甲苯磺酰基磁性微球属于疏水性磁性微球具备出色的偶联效率和较低的成本。甲苯磺酰基官能团能够与多种生物分子如抗体、蛋白质等形成稳定的共价键，从而实现高效的捕获和分离。同时，甲苯磺酰基磁珠的包被过程相对简单，无需复杂的活化步骤，降低了生产成本和时间。然而，甲苯磺酰基磁珠也存在一些缺点。首先，它们的反应条件较为苛刻，通常需要在高温和碱性环境下进行，这可能会对原料的稳定性和活性产生一定的影响。此外，如果封闭步骤处理不当，甲苯磺酰基磁珠可能会产生非特异性吸附，导致实验结果的假阳性，影响数据的准确性和可靠性。因此，在使用甲苯磺酰基磁珠时，需要严格控制反应条件和封闭步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。
甲苯磺酰基磁性微球偶联工艺
偶联原理：甲苯磺酰基磁性微球其表面特性表现为较强的疏水性。在进行偶联反应时，这一特性使得抗体或其他蛋白质配基能够首先通过疏水作用力被吸附到磁性微球表面上。随后，抗体分子上的氨基会与甲苯磺酰基发生逐步的化学反应，进而形成稳固的共价键连接。由于抗体的Fc区段相较于Fab区段具有更高的疏水性，因此，在抗体与甲苯磺酰基磁珠表面结合的过程中，Fc区段更易于首先与磁珠表面接触并结合，这种结合方式有利于抗体在磁珠表面形成理想的取向。
1.原料透析
透析是一种常用的分离技术，主要通过半透膜来实现样品中小分子和大分子的分离。在免疫检测原料的制备过程中，透析常用于去除未反应的小分子物质、杂质或盐类，以获得纯化的生物大分子，如蛋白质或多糖。
我们购买的原料中一般含有NaN3或ProClin等防腐剂，可能会影响后续的标记，同时原厂家的Buffer和pH值也有可能也不是我们想要的。在偶联前通常需要将一些影响偶联效率的物质去除，同时将原料的Buffer更换为我们想要的体系，因此偶联前的透析步骤（纯化步骤）必不可少，且需要慎重选择透析Buffer。同时有些特别原料可能在偶联前需要使用TX-100、TW-20或者SDS等物质进行处理，改变其构象，这一点一些特殊项目也需要优化。（个人观点，仅供参考）
2.磁性微球洗涤
磁性微球洗涤步骤的目的为，更换原厂家的Buffer为自己想要的Buffer（Tosyl磁性微球在中性pH值结合蛋白质巯基，在偏碱性pH值结合氨基），100 mM磷酸盐缓冲液（PB）pH7.4用于和巯基偶联，100mM硼酸盐或碳酸盐缓冲液pH9.5用于和氨基偶联。（个人观点，仅供参考）
3.加入透析后的原料
该步骤的重点为原料用量，原料太多可能导致磁性微球之间相互交联引起聚沉（一分子原料一般包含多个氨基），原料太少灵敏度不够。推荐用量为10~30μg抗体（抗原由于分子量差异较大，不同项目可能差异较大），最佳用量还是需要根据抗体种类和最终实验进行确定。（个人观点，仅供参考）
4.加入反应增强剂
甲苯磺酰基磁性微球为疏水性磁性微球，加入反应增强剂(NH4)₂SO₄主要是为了提高原料的疏水性，让原料和甲苯磺酰基磁性微球更容易接近，然而过多的(NH4)₂SO₄可能会导致原料聚沉或变性。因此每个项目需要优化反应增强剂的用量。这里需要提一点，反应增强剂的加入时间点也是一个可以优化的步骤，是原料加入后立即加入反应增强剂还是反应一段时间后再加入反应增强剂，不同项目结论可能也不一样。（个人观点，仅供参考）
5.偶联反应
主要注从偶联温度、偶联时间以及混匀方式和力度等方面考虑。甲苯磺酰基磁性微球一般需要37℃条件下旋转过夜反应。当然如果原料对温度比较敏感或者37℃偶联工艺不容易实现或者不容易放大，也可以考虑室温进行反应，但是反应时间需要优化。（个人观点，仅供参考）
6.封闭
甲苯磺酰基磁性微球为疏水性磁性微球，如果封闭不充分会非特异性吸附血清中的疏水性物质导致假阳性结果的产生，因此封闭步骤至关重要。封闭主要是为了封闭住未反应的活性位点（封闭多余的甲苯磺酰基）。封闭剂的选择也很关键，既要能封闭掉多余的活性位点，又要不引入新的特异性风险，主要从封闭剂的分子量大小和亲疏水性等方面进行考虑。（个人观点，仅供参考）
7.洗涤和储存
主要考虑Buffer对洗涤效果和稳定性的影响。（个人观点，仅供参考）
注意事项：偶联过程中不应含有除目标配体外含伯胺基团的物质，如：甘氨酸、BSA、Tris-HCl等。
END
⭐⭐⭐如果觉得上述内容对你有所帮助，请收藏并关注公众号。
历史文章：
