点击蓝字/关注我们
当待测物为抗原，且分子量较小时，由于只有一个抗原决定簇或者一个受体和配体的结合位点或者由于空间位阻的原因，无法采用夹心法检测，一般采用竞争法进行检测（当然也有例外，随着技术的发展小分子也可以采用小分子夹心法检测，最常用的模式是标记抗体结合抗原抗体复合物的复合抗原决定簇，该技术笔者后期将单独进行讨论）。另外由于一些特殊情况，有时抗体也可以采用竞争法进行检测（比如：HBeAb、HBcAb项目，主要是由于eAg具有明显的cAg免疫反应性，会产生假阳性，导致试剂特异性低）。
竞争法根据样本中待测物质（液相）与试剂中的固相（载体端）还是液相（标记端）竞争，分为固相-液相竞争法和液相-液相竞争法。（个人观点，仅供参考）
1. 固相-液相竞争法反应原理
固相-液相竞争法：样本中待测抗原或配体与固相载体上的抗原或配体，竞争标记的抗体或受体的结合位点，样本中待测抗原或配体浓度越高，获得的信号值越低，发光信号值与浓度成反比例关系。反应原理如下图：
液相-液相竞争法：样本中待测抗原或配体与标记的抗原或配体，竞争固相载体上抗体或受体的结合位点，样本中待测抗原或配体浓度越高，获得的信号值越低，发光信号值与浓度成反比例关系。反应原理如下图：
当然竞争法也有一些变体如优先竞争法、中和竞争法等。
优先竞争法：样本中待测抗原或配体优先与标记的抗体或受体反应，不清洗，再加入固相载体偶联的抗原或配体与标记的抗体或受体的剩余位点进行结合，发光信号值与浓度成反比例关系。反应原理如下图：
中和竞争法：样本中的抗体与固相载体上的捕获抗体竞争中和抗原，反应后清洗去除样本中抗体与中和抗原的复合物，再加入标记抗体形成“固相载体-捕获抗体-中和抗原-标记抗体”免疫复合物，发光信号值与样本中抗体浓度成反比例关系。反应原理如下图：
PS：以上图示均为笔者根据自己经验绘制，如果有失误处，欢迎大家指正。另以上图示未列举全部的反应原理，大家可以根据实际情况更改。
2. 竞争法适用范围
（1）待测物质分子量较小，只有一个抗原决定簇的情况下。
（2）待测物有多个抗原决定簇，但是由于空间位阻不能使用两个抗体进行识别时（该情况一般较少）。
（3）当抗原的特异性较差，此时为了提升试剂的特异性，被迫选择竞争法。
3. 优缺点
优点：（1）可以检测小分子待测物。（2）可以解决抗原间的交叉反应性问题，提升试剂特异性。（3）适用范围广：竞争法可用于测定各种类型的待测物，包括蛋白质、多肽、激素等。
缺点：（1）检测范围窄，竞争法的动态范围相对较窄，导致检测范围有限。（2）对试剂精密性要求较高，由于检测范围窄，信号值不呈比例变化，曲线被压缩，信号值CV可能很好，但是换算成浓度值后可能CV会被放大。（3）可能存在交叉反应：在某些情况下，竞争法可能出现交叉反应，待测物的结构类似物可能影响检测结果的准确性。
总之，竞争法是一种有效的免疫检测技术，具有可检测小分子待测物、适用范围广等优点，但也面临检测范围窄、对试剂精密性要求高和可能的结构类似物交叉干扰等挑战。在实际应用中，需要根据实际情况选择合适的方法。
⭐如果觉得上述内容对你有所帮助，请收藏并关注公众号。
历史文章：
