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最近有粉丝反馈，之前的文章“链霉亲和素磁性微球（磁珠）偶联工艺”未包含游离模式，笔者回头看了一下确实漏掉了非常重要的游离模式，因此本文想讨论一下这两种模式的优缺点，供大家参考使用。（首先要感谢一下这位粉丝的反馈，谢谢）
链霉亲和素磁性微球（磁珠）在使用过程中一般有两种模式，预包被模式和游离模式。
游离模式：生物素化原料（Biotin-Ag/Ab）和链霉亲和素磁性微球（磁珠）（Mb-Streptavidin）分为两个组分。
预包被模式：生物素化原料提前和链霉亲和素磁性微球（磁珠）进行偶联，作为一个试剂组分（Mb-Streptavidin-Biotin-Ag/Ab）。Mb：Magnetic bead，原料以抗原/抗体举例。
预包被模式的偶联工艺见之前的文章“链霉亲和素磁性微球（磁珠）偶联工艺”，这里将不再赘述。
游离模式则不存在链霉亲和素磁性微球（磁珠）的提前偶联。
游离模式和预包被模式的反应模式还是有点区别，现总结如下：
备注：上述预包被模式中可以根据项目特点决定是否需要增加试剂3，这里举例均不包含试剂3。
1.从反应模式看（上图），游离模式会比预包被模式多一个组分，可优化空间较少，而预包被模式的可操作性更强，可以根据需要决定是否增加第3试剂。
2.从反应性上看，游离模式抗原/抗体的构象更接近天然状态（不受磁性微球的影响），抗原/抗体的反应性更强，预包被模式抗原/抗体的构象可能会受磁性微球的遮挡，反应性可能略弱。（具体项目具体分析，多数项目反应性一样）。
3.从封闭角度看，游离模式可以说无封闭步骤（缓冲体系中可以加入封闭剂，但是边反应边封闭，可能会影响免疫复合物和磁性微球的连接），而预包被模式通常都会有封闭步骤，有利于降低非特异性吸附。
4.从干扰角度看，游离模式的未包被磁性微球均会接触样本（未包被磁性微球空余位点很多），磁性微球容易吸附样本中的干扰物质从而影响结果，而预包被模式其一通常会有封闭步骤，其二通常会选择两步法（有清洗步骤），样本中干扰物质影响结果的可能性更下。
5.从抗游离生物素的能力来看，游离模式容易受游离生物素的干扰，需要添加抗游离生物素的阻断剂，会增加成本的同时还可能会带来假阳性，如果抗游离生物素的阻断剂未选择好可能还会影响灵敏度。
6.各种模式的HOOK效应的影响，已在上图中标记，这里不再赘述。
7.游离模式在使用间接法时，只要未包被磁性微球吸附了抗体，就会产生信号，因此需要特别注意对特异性进行评价。
以上是个人观点，仅供大家参考。
END
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