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化学发光免疫分析法（CLIA）结合了高特异性的免疫反应和高灵敏度的化学发光，因此灵敏度和特异性都较高。其基本原理是，反应体系中的发光物质，在一定的条件下发生化学反应释放能量，产生激发态中间体。这些激发态中间体不稳定，返回基态时，会发射光子。通过测量发光信号，并与标准曲线进行比对，则可以计算出样品中待测物质的浓度。
化学发光免疫分析法根据发光原理不同，可以分为直接化学发光法、酶促化学发光法和电化学发光法。
分类 | 示踪物 | 底物 | 发光物质 | 发光类型 | 代表厂家 |
直接化学发光法 | 异鲁米诺（ABEI） | NaOH、H2O2 | 异鲁米诺（ABEI） | 闪光型，发光时间短，波长470nm | 新产业、索灵 |
吖啶酯（AE） | NaOH、H2O2 | 吖啶酯（AE） | Abbott、亚辉龙、迈克、西门子 | ||
酶促化学发光法 | 碱性磷酸酶（ALP） | 1，2-二氧环己烷衍生物（AMPPD） | AMPPD及其衍生物 | 辉光型，发光时间长，波长425nm | 迈瑞、贝克曼 |
辣根过氧化物酶（HRP） | 鲁米诺及其衍生物 | 鲁米诺及其衍生物 | 辉光型，发光时间长，波长425nm | 安图、强生 | |
电化学发光法 | 三联吡啶钌 | 三丙胺（TPA） | 三联吡啶钌 | 可以持续稳定的发光，波长610nm | 罗氏、普门 |
1. 直接化学发光法
直接化学发光法的特点为示踪物直接标记在抗体、抗原、配体或受体上。标记物中的示踪物不需要酶的催化作用，在碱性条件下直接发光。目前最常见的直接化学发光示踪物主要有吖啶酯和异鲁米诺（ABEI）。
具体发光原理为：在碱性H2O2溶液中，吖啶酯分子受到过氧化氢离子的攻击时，吖啶环上的取代基与C-9和H2O2形成不稳定的二氧乙烷，随后二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮。在含有H2O2的稀碱性溶液中，吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物能够发光，无需催化剂，且发光系统简便。这类化合物的发光特性为闪光型，加入发光启动试剂后约0.4秒内光强达到最大，半衰期约为0.9秒，极为高效。吖啶酯发光波长为470nm。反应快速，检测时间短。为了增强吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物的化学发光强度，常在发光启动试剂中添加Triton X-100、CTAC、Tween-20等表面活性剂。
直接化学发光法示踪物为化学合成，成本较低；在无示踪物的情况下，底物不能单独发光，因此本底较低；示踪物分子量较小，空间位阻较小，标记量适度提升。（个人观点，仅供参考）
2. 酶促化学发光
酶促化学发光免疫分析主要是将酶标记在抗原、抗体、配体或受体上进行免疫反应，随后免疫复合物上的酶作用于发光底物产生发光，最终通过发光信号测定仪进行测定。化学发光的强度由酶的浓度决定。辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）是常用的标记酶，而鲁米诺和AMPPD则是代表性的发光底物。
鲁米诺是一种强效的化学发光物质，通常在中性溶液中以偶极离子（两性离子）形式存在。在碱性溶液中，它转变为二价负离子，并可被氧分子氧化为能产生化学发光的中间体。在氧化剂的作用下，鲁米诺被转化为激发态，随后激发态衰变回基态并发出荧光。鲁米诺发光的原理与羰基化合物的亲核加成相关，产生的荧光为蓝光，波长为425nm左右。这类化合物的发光特性为辉光型，发光时间可持续30~60min，启动发光反应后约2min发光强度达到最大。因此反应时间较长。
由于底物在没有酶的情况下也有一定的发光因此一般本底较高；酶促反应可以放大发光过程，酶促化学发光一般灵敏度较高（样本的阴阳性分的较开）；酶促化学发光对酶的纯度和工艺较高，标记物成本会略高；酶分子量较大，可能引起免疫反应导致产生抗体，需要警惕酶分子引起的假阳性。（个人观点，仅供参考）
3. 电化学发光法
电化学发光法是将电化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记抗原、抗体、配体或受体。当在电极上施加一定的电压或电流时，电极上的电化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+与电子供体三丙胺（TPA）发生化学反应，产生激发态。激发态返回基态时释放能量，发光波长为610nm左右。
电极表面的电化学反应和化学发光过程可以循环进行。可以通过增加循环次数放大信号，检测灵敏度大大提高，故电化学发光检测具有高灵敏度的特点。（个人观点，仅供参考）
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