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碘乙酰胺(Iodoacetamide,IAM,IAA)是一种有机化合物,其化学式为ICH₂CONH₂,是一种白色或类白色结晶性粉末。碘乙酰胺是一种能与巯基反应的烷基化试剂,用于在蛋白质表征和肽图分析中封闭还原的半胱氨酸残基。半胱氨酸还原后游离巯基与碘乙酰胺发生烷基化反应,会共价添加一个氨基甲酰甲基基团(57.07 Da),从而防止二硫键的形成。烷基化后再加入还原剂,会与过量的碘乙酰胺发生反应。
1. 物理性质
外观:白色或类白色结晶性粉末
分子量:184.96
化学式:C2H4INO
CAS: 144-48-9
熔点: 93°C-96°C
溶解性:易溶于乙醇、丙酮和热水,微溶于冷水,不溶于乙醚。
稳定性:见光易分解,因此通常需要储存在棕色瓶中,并用锡箔纸裹住瓶身,置于阴凉处保存。
2. 化学性质
碘乙酰胺的活性基团是碘乙酰基(ICH₂CO-),它可以与半胱氨酸残基上的巯基(-SH)发生烷基化反应,生成稳定的硫醚键,从而封闭巯基。这一反应通常在温和的条件下进行,如室温下20分钟即可完成。
3. 应用
蛋白质组学研究:在蛋白质组学研究中,碘乙酰胺常用于蛋白质的烷基化处理。通过封闭半胱氨酸残基上的巯基,可以防止蛋白质在样品处理过程中发生不必要的交联或降解,从而提高蛋白质的稳定性和可检测性。
多肽测序:在多肽测序过程中,碘乙酰胺的封闭作用可以保护半胱氨酸残基不受测序过程中可能发生的氧化或其他化学反应的影响,从而确保测序结果的准确性。
酶抑制剂:碘乙酰胺还可以作为酶抑制剂使用,通过封闭酶分子中的巯基,抑制酶的活性,从而实现对酶催化反应的调控。
4. 优缺点
优点:
反应迅速:碘乙酰胺与巯基的反应速度较快,通常在室温下短时间内即可完成。
用途广泛:碘乙酰胺在蛋白质组学、多肽测序和酶抑制剂等领域均有广泛应用。
易于操作:碘乙酰胺的溶解性和稳定性适中,易于在实验室中操作和使用。
缺点:
见光易分解:碘乙酰胺的稳定性较差,见光易分解,因此需要储存在棕色瓶中并避光保存。
毒性问题:虽然碘乙酰胺在生物实验中具有广泛应用,但其毒性问题也不容忽视。过量或不当使用可能会对人体健康造成危害。因此,在使用时需要严格控制用量和条件。
5. 注意事项
碘乙酰胺不稳定且对光敏感。应在使用前立即制备溶液,并在暗处进行烷基化。如果碘乙酰胺的量有限且pH值略呈碱性,则半胱氨酸修饰将是唯一反应。过量的碘乙酰胺或非缓冲的碘乙酰胺试剂还可能使胺类(赖氨酸、N端)、硫醚(甲硫氨酸)、咪唑(组氨酸)和羧酸盐(天冬氨酸、谷氨酸)发生烷基化。在使用碘乙酰胺时,应严格控制其用量和反应条件,以避免对实验结果产生负面影响。
碘乙酰胺应储存在棕色瓶中并避光保存,以防止其分解。
在处理含有碘乙酰胺的样品时,应采取适当的防护措施,如佩戴手套和口罩等,以防止其对人体健康造成危害。
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