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蛋白质是一类含有空间结构的高分子化合物。二硫键的存在会影响电泳的分辨率，因此一般需要使用还原剂打开蛋白质中或蛋白质亚基间的二硫键。二硫键问题对碱性蛋白尤为突出，因为在碱性环境中，二硫键形成速度更快。在进行肽段分析前，也通常需要先加入二硫苏糖醇（DTT）或三（2-甲酰乙基）磷盐酸盐（TCEP）等还原剂，打开二硫键。为了阻止还原后的自由巯基再次形成二硫键，我们经常使用烷基化试剂将巯基封闭，常用的烷基化试剂有碘乙酰胺（IAM，iodoacetamide）、氯乙酰氨（ClAM，chloroacetamide）、碘乙酸和N-乙基马来酰亚胺等。本文主要介绍氯乙酰氨。
1. 基本信息
中文名称：氯乙酰胺
英文名称：2-Chloroacetamide
别名：2-氯代乙酰胺、氯乙酸酰胺等
化学式：C2H4ClNO
分子量：93.5123
CAS号：79-07-2
2. 物理性质
外观：白色针状结晶
熔点：116~121℃（不同来源数据略有差异）
沸点：225℃（分解）或256°C at 760 mmHg
密度：0.84（或1.268g/cm3，不同条件下密度可能有所不同）
闪点：108.6°C或170℃（不同来源数据）
溶解性：能溶于10倍体积的水和乙醇，微溶于乙醚。
3. 化学性质
氯乙酰胺是一种与硫醇反应的烷化试剂，用于封闭还原型半胱氨酸残基，以便进行蛋白质表征和肽图分析。与碘乙酰胺类似，氯乙酰胺修饰会导致还原型半胱氨酸硫醇发生共价加成，添加一个氨甲酰甲基基团（57.07 Da），从而防止二硫键的形成。然而，与碘乙酰胺相比，氯乙酰胺在溶液中的反应活性较低且更稳定，这使其对半胱氨酸的修饰更具特异性，减少了对其他氨基酸的非目标标记和副反应。
注意：氯乙酰胺具有轻微的光敏性。应在使用前立即配制溶液，并在烷基化过程中尽量减少对光的暴露。尽管半胱氨酸修饰是主要的烷基化反应，但使用过量的氯乙酰胺或缓冲液pH值不正确可能导致胺类（赖氨酸、N-端）、硫醚类（甲硫氨酸）、咪唑类（组氨酸）和羧酸类（天冬氨酸、谷氨酸）发生烷基化。
4. 一般步骤
（1）将5-100 μg蛋白质样品溶解于100 μL 100mmol/L的碳酸氢铵（pH 8.0）或100mmol/L的三乙胺碳酸氢盐（pH 8.5）缓冲液中。
（2）加入1μL 500mmol/L的中性TCEP溶液，使TCEP的最终浓度为5mmol/L，并在37°C下孵育样品30分钟。
（3）在使用前立即将一管氯乙酰胺（2mg）溶解于107μL 100mmol/L的碳酸氢铵（pH 8.0）或100mmol/L的三乙胺碳酸氢盐（pH 8.5）缓冲液中，以制备200mmol/L的氯乙酰胺储备溶液。
（4）向样品中加入11μL 200mmol/L的氯乙酰胺，使氯乙酰胺的最终浓度为20mmol/L，并在避光条件下于室温孵育30分钟。
使用一步法进行巯基的封闭方案：蛋白样品准备好后，将TCEP和氯乙酰胺同时加入样品中，在避光条件下于室温孵育30分钟即可。（物料的量，时间，温度等需要根据不同样品进行摸索）
5.安全性
毒性：氯乙酰胺吞食有毒，与皮肤接触可能致敏，并有损害生育能力的危险。
防护措施：在生产和使用过程中，应穿戴适当的防护服和手套，避免吸入粉尘和接触皮肤。若发生事故或感不适，应立即就医。
综上所述，氯乙酰胺是一种具有多种用途的化学物质，在有机合成、医药中间体以及农业等领域都有广泛应用。然而，由于其具有毒性，在使用过程中需要严格遵守安全操作规程，确保人员和环境的安全。
以上为本次的分享，希望对大家有所帮助。以上内容均为个人观点，仅供大家参考。
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