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三级淋巴结构（TLS）是在癌症和自身免疫性疾病等慢性炎症背景下观察到的淋巴细胞的异位形成。TLS已成为提示TNBC较好预后和预测治疗反应的有前景的指标。TNBC是一种高度免疫原性的乳腺癌亚型，具有快速进展、早期复发和预后不佳的特点。这篇来自新加坡的研究旨在进一步阐明TLS的细胞和分子特征以及它们与TNBC预后的关系。研究对386例TNBC进行了TLS的形态学分析，以确定TLS的阳性率和明显的形态学差异。通过免疫组化和免疫荧光染色确定TLS的细胞组成，通过蛋白质组学和转录组学分析确定TLS阳性和TLS阴性TNBC之间的差异表达基因。结果发现具有生发中心的TLS的存在提示较好的总生存率。转录组分析还显示，与细胞死亡和抗原呈递相关的基因在TLS阳性的TNBC中高表达（图1）。

图1

图1

大多数TNBC患者对免疫治疗反应不佳，而反应较好的患者又经常由于治疗耐药而复发。因此，临床需要开发新的治疗策略以增强TNBC的免疫原性。赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1）是一种组蛋白去甲基化酶，被认为是抗肿瘤免疫和免疫治疗反应性的负调控因子。重要的是，有证据表明，抑制LSD1能增加肿瘤对T细胞免疫和浸润的敏感性，这为增强TNBC患者对免疫治疗的反应提供了机会。来自新加坡总医院的研究者对36例伴有LSD1 表达的TNBC病例进行了GeoMX数字空间分析（DSP）。使用PanCK、DNA和CD8的免疫荧光技术在TNBC上选择不同的感兴趣区域（ROI），并进行条形码RNA探针混合靶向检测（全转录组图谱）。结果发现LSD1+的TNBC中淋巴细胞计数和CD8浸润水平较低。在LSD1-病例中，差异基因表达模式（在CD8富集的ROI中）显著上调，显示出关键免疫原性通路（包括先天免疫反应和炎症反应）被激活（图3）。靶向表观遗传机制如何改变细胞表型和重塑肿瘤微环境，从而诱导强大的免疫原性反应还值得深入研究。

图3

空间组织分析如何与常规病理学实践相关联，目前仍处于探索初期阶段。这项研究将标准组织病理学参数与空间分辨蛋白质表达结合，用以研究新辅助化疗后迅速复发的三阴性乳腺癌。研究者对20例迅速复发（RR，NAC后≤12个月内复发）和39例从未复发（NR）病例的NAC后残余肿瘤（RT）进行评估。评估参数包括残余癌负荷（RCB）、肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）、p53和Sox10免疫组化，以及应用NanoString数字空间分析仪（DSP）分析的48种免疫和凋亡相关蛋白质表达。结果显示，通过使用肿瘤大小（RCB）、免疫（TIL）和突变谱（p53 IHC）的标准组织学参数对空间分子表达数据进行分析，可以更好地了解NAC后RR和NR TNBC之间的差异。RR病例似乎主要有代谢方面的特点(高IDO1和GAPDH)，如果得到证实，可能有助于调整TNBC NAC后的治疗。

基因表达谱研究已将TNBC分为多个组别，但除了LAR亚型具有相对良好的预后外，其余预后意义尚不清楚。免疫组化（IHC）已被用于定义TNBC中的基底亚型和腔面亚型，但目前尚不清楚IHC标记物表达是否可用于预测预后。这项研究中，研究者利用245例TNBC病例构建了组织微阵列，排除了术前新辅助化疗病例。IHC染色标记包括腔面（AR，INPP4B）、基底（SOX10，Nestin，CK5，EGFR）和诊断标记（GCDFP15，乳球蛋白，GATA3，TRPS1）。并结合其他临床病理参数进行了生存分析。结果显示，AJCC分期、化疗和SOX10/AR双阴性是影响预后的重要因素(单因素和多因素分析)。LVI和 Nottingham预后指数（NPI）在单因素分析中与预后较差相关。而sTIL,、CD8+ T细胞、年龄、组织学、分级、Ki-67、PD-L1状态和其他免疫标记结果对预后的影响无显著差异。AR/SOX10双阴性TNBCs显示出较差的总生存率、无复发生存率、无远处转移生存率（图1）及乳腺癌特异性生存率（图2）。

HER2低表达乳腺癌是一种具有特定临床病理特征和治疗策略的新兴亚型，然而在TNBC中对其分子特征和预后的研究有限。浙江大学邵逸夫医院的杨霞教授团队利用TCGA和METABRIC数据集以及SRRH队列的1006例TNBC的临床病理和基因组数据，将患者分为HER2低表达（N = 676）和HER2零表达（N = 330）两组，以阐明HER2状态对TNBC的临床病理特征、生存结果、分子特征和免疫特征的影响。研究发现，与SRRH队列中HER2零亚组相比，HER2低表达TNBC具有更低的组织学分级和Ki67指数。但HER2状态与DFS、RFS或OS之间没有明显的关联。基因组突变分析显示，HER2低表达TNBC表现出更高的PIK3CA、MUC17和PTEN的突变频率，而HER2零亚组FAT3、RYR2和CSMD3的突变频率更高。此外，PIK3CA和MUC17的联合突变在HER2低表达亚组中具有更高的频率，并与TNBC的较差生存相关。免疫特征分析显示，HER2低表达患者中浆细胞的百分比较高。

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三阴性乳腺癌往往不表达常规的乳腺特异性标记物，因而在原发与转移的鉴别中出现困难。TRPS1 和 Wnt9b 最近被认为是具有高敏感性和特异性的乳腺标记物。该研究比较了这些新型标记物与 GATA3 和 SOX10 的表达。研究回顾了 162 例 TNBC 患者，对 GATA3、SOX10、TRSP1 和 Wnt9b 免疫组化进行评估，结果见表3。结果显示，TRSP1 和 Wnt9b 的表现均优于 GATA3 和 SOX10。无论其转移情况如何或 TNBC 的状态如何，TRSP1 和 Wnt9b 都可以作为识别乳腺癌的敏感工具。

表3

随着抗HER2抗体-药物偶联物的出现，HER2-低表达乳腺癌（BC）患者获得了较好的治疗效果。食品和药物管理局(FDA)也扩大了Pathway 4B5检测作为伴随诊断的使用。然而，实际上，许多病理实验室使用了不同的HER2免疫组织化学(IHC)染色条件，这与FDA建议的条件不同，可能会导致HER2结果的不同。

TRPS1在大多数乳腺癌中是一个高度敏感的标记物。然而，一些小样本研究显示，在AR阳性大汗腺癌中，TRPS1的表达较低(多数阳性率低于20%)。来自复旦大学附属肿瘤医院的杨文涛、水若鸿教授团队探讨了TRPS1与TNBC中AR表达的相关性，以及TRPS1在相对较大样本的大汗腺癌中的表达。该研究收集了969例TNBC和102例大汗腺癌，研究发现，TNBC中TRPS1与AR表达呈负相关。与以往的研究相比，大汗腺癌(尤其是HER2阳性表型)中TRPS1的表达相对较高（表5、表6）。

表6

乳腺腺鳞癌(Adenosquamous carcinoma，ASC)占乳腺癌的1%以下，是化生性癌的一种亚型，其特征是形成良好的小管、鳞状细胞岛和梭形细胞，具有三阴性免疫表型。与其他TNBC相比，预后更好。由于这类肿瘤很少见，因此使用敏感标记物确认其乳腺起源是很重要的。目前，GATA3是广泛用于确认乳腺原发的免疫组化标记。GATA3在70-90%的乳腺癌中呈阳性，但在TNBC中则降至15-60%。最近，TRPS1被认为是TNBC的敏感标志物。这项研究分析了SOX10、GATA3和TRPS1在25例ASC中的作用，并将其与TNBC（111例组织芯片）中的总体表达进行了比较。结果见表4，与GATA3相比，TRPS1具有更高的敏感性，因此是乳腺ASC更好的标记物。并且TRPS1在乳腺ASC的敏感性高于其他TNBC。与GATA3类似，TRPS1也具有作为核标记物的优势。

表4

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