8月9日，石药的一款一类新药SYS6020注射液获批临床，拟用于难治性活动性系统性红斑狼疮，是一款基于mRNA通过LNP方式制备的针对BCMA的CART。6月份的时候，该注射剂通过CDE默示许可获批临床，用于治疗复发或难治性多发性骨髓瘤。一药多报。
目前的大多数CART，不管是病毒载体还是非病毒载体都存在基因随机插入的问题，存在一定的致癌风险，虽然概率极低。
基于mRNA的CAR表达技术具有独特的优势，包括瞬时蛋白表达、非病毒递送平台（如脂质纳米颗粒，LNP）、极低的转基因整合风险，以及多样化的药物模式（体外mRNA CAR-T细胞和体内mRNA CAR）。
值得注意的是，在非癌症适应症中应用CAR-T疗法时，风险与收益的平衡将是最重要的考虑因素，这也凸显了基于mRNA的CAR-T技术在克服现有挑战和满足新兴医疗需求方面的独特优势。此外，由于简单性、低成本以及可接受的安全性，使用编码CAR的mRNA来工程改造T细胞为开发现成的、低成本且安全的CAR-T细胞疗法提供了一种替代策略。
但是呢，基于mRNA的CAR-T疗法在十年前就已经进行了临床测试，但它们的临床转化受到了局限，主要是因为疗效不足。mRNA的瞬时表达特性在CAR-T应用中是一把双刃剑。瓶颈在于线性mRNA在体内本质上不稳定，这必然导致其疗效时间较短。线性mRNA在细胞内半衰期很短，很容易在细胞内降解，一旦降解，CART的疗效就会大大降低。
与线性mRNA不同，环状mRNA（cmRNA）是共价闭合的环状RNA分子，比线性mRNA更稳定，并能在哺乳动物细胞中翻译出更多的蛋白质。因此，理论上基于cmRNA的CAR可以在功能性免疫细胞的细胞膜上实现更高和更持久的CAR表达，从而具有产生更强抗肿瘤免疫反应的潜力。
发表在bioRxiv一篇文章《Scarless circular mRNA-based CAR-T cell therapy elicits superior anti-tumor efficacy》介绍了一个置换内含子外显子（PIE）平台，用来合成无痕环状mRNA（cmRNA），以实现高效CAR表达和持久的疗效。cmRNA显著增加了人T细胞表面的抗CD19 CAR的数量和持续时间。基于cmRNA的抗CD19 CAR-T细胞相较于线性mRNA对照组显示出更优的抗肿瘤效果。
这个 PIE 平台的原理是在目标基因（GOI）的 5' 端（称为 E2'）和 3' 端（称为 E1'）分别实现经典 PIE 中 E2 和 E1 的功能。无痕 PIE 平台中的环状前体 RNA 包含了核酶的 3' 半段、目标基因（其中包含了 E2' 和 E1' 的替代序列）、以及核酶的 5' 半段。这一合理的设计让我们能够合成真正无痕的环状 RNA 产物，通过使用 RNase R 处理前体 mRNA 和 cmRNA 产物，线性的前体 mRNA 则被消化掉了。定量测量环化效率约为 90%。
细胞系检测了由 Hi-Scarless-PIE 合成的无痕环状信使 RNA（cmRNA）驱动的蛋白质表达能力显示：cmRNA 表达的蛋白质持续时间都比线性 mRNA 要长。cmRNA 表达的蛋白质半衰期大约为 4.5 天，而线性 mRNA 的蛋白质表达半衰期大约只有 2.5 天。使用脂质纳米颗粒（LNP）包裹编码萤火虫萤光素酶（FLuc）的 cmRNA，测试无痕 cmRNA 在体内的蛋白质表达能力：cmRNA 表达的 FLuc 蛋白显示出强效表达，并且持续了 14 天。无论是体外还是体内，无痕 cmRNA 都展现出了更强大和更持久的蛋白质表达能力。
制备CD19 CAR-T细胞测试 线性 mRNA 和 cmRNA 哪个更加长久稳定，结果显示在电穿孔后的 6 小时内，线性 mRNA 组的 CAR 表达达到峰值，随后在一天后开始下降，第四天降至无法检测的水平。相比之下，cmRNA 组的 CAR 表达在转染后的一天达到最高值，并维持了两天，之后才开始下降，在转染后第七天降至无法检测的水平。
进一步研究两种类型的 CAR-T 细胞在体内的持久性，在电穿孔后一天通过尾静脉注射给予每只小鼠 3×10^6 个 CAR-T 细胞，注射后第 1 天线性 mRNA 组的 CAR-T 细胞比例约为 40%，而 cmRNA 组的比例超过 80%。到了注射后第 3 天，线性 mRNA 组的 CAR-T 细胞比例减少至 20%，而 cmRNA 组的 CAR-T 细胞比例仍然保持在 50% 以上。
接下来在 NALM-6 肿瘤模型中评估了基于线性 mRNA 的抗 CD19 CAR-T 细胞和基于 cmRNA 的抗 CD19 CAR-T 细胞有效性，结果显示：注射基于 cmRNA 的抗 CD19 CAR-T 细胞的小鼠其肿瘤负担显著低于未转染 T 细胞组和基于线性 mRNA 的抗 CD19 CAR-T 细胞组，注射基于 cmRNA 的抗 CD19 CAR-T 细胞显著延长了小鼠的生存时间，提供持久的抗肿瘤效果。
mRNA 平台提供了一种理想策略来避免传统 CAR-T 技术中由病毒载体、基因组整合及永久性转基因表达带来的风险。随着靶向脂质纳米颗粒（LNP）递送系统的进展，体内 CAR-T 疗法——即通过将编码 CAR 的 mRNA 靶向递送到 T 细胞来在人体内生成 CAR-T 细胞——将成为下一代 CAR-T 疗法开发浪潮中的游戏规则改变者。环状mRNA和CART组合未来可期。
