DNAJC9通过维持组蛋白供应链的保真度来防止CENP-A错定位和染色体的不稳定

着丝粒组蛋白H3变体CENP-A在许多癌症中过度表达。CENP-A在非着丝粒区域的错误定位导致染色体不稳定(CIN)，这是癌症的一个标志。然而，促进或防止CENP-A错误定位的途径仍然不明确。在这里，作者对CENP-A定位的调节因子进行了全基因组的RNAi筛选，发现DNAJC9，一个与组蛋白H3-H4蛋白折叠有关的J结构域蛋白，是限制CENP-A错定位的一个因素。缺乏DNAJC9的细胞在整个基因组中表现出CENP-A的错误定位和CIN表型。全局相互作用组分析显示，DNAJC9缺失促进了CENP-A与DNA复制相关的组蛋白伴侣MCM2相互作用。DNAJC9耗竭导致的CENP-A错定位依赖于MCM2，因此当H3-H4供应链中断时，MCM2是导致CENP-A在异位位点沉积的驱动因素。组蛋白H3.3缺失的细胞也表现出CENP-A错定位。总之，作者已经定义了防止CENP-A错定位的新因素，并证明了由组蛋白伴侣如DNAJC9调节的H3-H4供应链的完整性限制了CENP-A错定位和CIN。

着丝粒是一个特殊的基因组区域，它在细胞分裂过程中指导染色体的稳定传递。着丝粒染色质完整性或着丝粒结构的缺陷可通过错误的染色体分离导致染色体不稳定性(CIN)，从而驱动非整倍体，这是癌症和发育障碍的复发性特征。组蛋白H3变体CENP-A(出芽酵母中的Cse4，裂变酵母中的Cnp1，果蝇中的CID)定义着丝粒染色质，是建立着丝粒组装和着丝粒-微管附着的关键成分之一。

限制CENP-A在着丝粒染色质上的定位对染色体的稳定性至关重要。CENP-A对于着丝粒的募集与典型组蛋白H3装载到染色质是分离的，涉及多种调节机制。例如，专用伴侣HJURP通过与Mis18复合体的相互作用，在终末期/ G1早期将CENP-A沉积在着丝粒上，Mis18复合体由PLK1和CDK1/2动态调节。在DNA复制过程中，先前存在的CENP-A的再循环及其在着丝粒上由HJURP重新装载与解旋酶MCM2一起发生。转录水平的调控精确地控制了CENP-A的表达，以确保在G2时达到最大水平，最近的研究表明，在细胞周期依赖的CENP-A蛋白水平调控中，CENP-A的特定翻译后修饰(PTMs)，如ser68的磷酸化和Lys49和Lys124的泛素化。

CENP-A (Cse4、Cnp1和CID)在非着丝粒区域的错误定位，有助于出芽酵母、裂变酵母和苍蝇的CIN。此前，作者在HeLa、RPE1和DLD1人类细胞系中检测了CENP-A错定位的后果，并首次提供证据表明，过表达的CENP-A错定位通过削弱天然着丝粒的完整性而导致CIN。此外，作者报道过表达DLD1的CENP-A细胞表现出更高的侵袭性和非整倍性，并具有核型异质性。过表达的CENP-A的错定位可以通过消耗H3.3-H4伴侣DAXX来防止，这降低了癌细胞的侵袭性并挽救了CIN表型。另一种H3.3-H4伴侣HIRA的缺失导致CENP-A在结直肠癌和宫颈癌细胞系以及出芽酵母。在p53缺陷的情况下，用电离辐射和DNA损伤剂处理过表达CENP-A的癌细胞具有增殖优势。在功能性p53存在的情况下，CENP-A过表达会对电离辐射产生敏感性。这些发现具有直接的临床相关性，因为据报道，CENP-A在各种癌症类型中过表达，包括前列腺癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌和胃癌，并且其过表达与预后不良、疾病分期、基因组不稳定性和对治疗干预的反应改变相关。最近的证据还表明，CENP-A亚核定位的改变可预测头颈部鳞状细胞癌的治疗反应。因此，确定促进或阻止CENP-A错定位到非着丝粒区域的因素可能有助于CENP-A过表达癌症的预后和治疗。尽管了解了CENP-A错定位对CIN的影响，但作者缺乏对促进或防止CENP-A错定位的途径的全面分析。

作者最近描述了一种基于图像的分析，使用YFP标记的CENP-A作为报告基因来量化间期细胞中核CENP-A的水平。通过该实验和521个编码染色质修饰因子的基因的RNAi筛选，作者发现了H3.1/2伴侣CHAF1B在防止CENP-A和CIN错定位中的新作用。在这里，作者报告了在全基因组RNAi筛选中使用相同的测定，以产生第一个全面鉴定防止人类细胞中CENP-A错定位的因素。筛选发现DNAJC9 (DnaJ同源物，C亚家族，成员9)是正确定位CENP-A的关键调节因子。DNAJC9是含J结构域热休克蛋白HSP40家族的成员，最近被发现是组蛋白H3.1/2/3-H4复合体的合作伙伴。HSP40蛋白的J结构域结合并刺激HSP70分子伴侣的ATP酶活性，从而调节多种蛋白质的正确折叠。在本研究中，作者发现了DNAJC9在预防CENP-A错定位和CIN方面迄今未被研究的作用。缺失DNAJC9的细胞显示出染色质中CENP-A的富集，CENP-A错定位到非着丝粒区域，以及CIN表型。通过对DNAJC9缺失细胞中CENP-A的相互作用组分析，作者发现MCM2是最重要的相互作用因子，进一步的研究表明，MCM2导致了DNAJC9缺失细胞中CENP-A的错定位。总的来说，作者的研究定义了新的CENP-A定位调控因子，并强调了H3-H4伴侣蛋白在限制CENP-A定位和CIN中的多方面作用。

全基因组RNAi筛选确定改变核CENP-A水平的因素

图1 基于全基因组图像的RNAi筛选确定显示核CENP-A水平改变的因素

(A)散点图显示用siRNA文库处理的HeLa YFP-CENP-AHigh细胞中YFP-CENP-A水平的中位数(z分数)，siRNA文库靶向21320个基因(每个基因3个siRNA)。图中显示了基因水平的数据，当靶向导致更高或更低的核YFP-CENP-A水平时，分别以红色或蓝色点突出显示。(B)柱状图显示HeLa YFP-CENP-AHigh的初级和次级验证筛选结果。结果显示，siRNA处理导致YFP-CENP-A水平中位数比siRNA对照组高两倍以上。(C)使用STRING数据库对(B)中确定的候选基因进行功能分析。网络从字符串分析(https:// stringdb.org/)基于证据的互动来源，包括“实验”，“数据库”和“文本挖掘”。根据(B)所示的YFP-CENP-A Z-score值和颜色等级对节点的边界进行着色。(D)高通量主屏幕的代表性图像，显示阴性对照或转染DNAJC9 siRNA的HeLa YFPCENP-AHigh细胞系中的YFP-CENP-A信号。使用相同的成像参数在×40的放大倍率下获得图像。比例尺:20µm。

在整个细胞周期中，DNAJC9耗竭增加核CENP-A水平

DNAJC9缺失的细胞表现出CENPA和CIN表型的错误定位

图2 在Hela YFP-CENP-A low中，DNAJC9耗竭后核CENP-A水平升高

(A)细胞核CENP-A水平在DNAJC9缺失的细胞中升高。免疫荧光图像显示表达DOX诱导的siRNA抗性DNAJC9的HeLa YFP-CENP-A low细胞中的核CENP-A水平。用siNeg或siDNAJC9.3转染细胞。DOX诱导的siRNA抗性DNAJC9的表达恢复了siDNAJC9.3转染细胞中增加的核CENP-A水平。比例尺:15µm。(B)散点图显示在(A)中描述的条件下核CENP-A强度。N表示三个生物重复中每个条件下分析的细胞总数，并给出标准差(SD)的平均值。P值采用单因素方差分析，采用Tukey 's特设检验。(C)在DNAJC9缺失的细胞中，细胞核CENP-A水平在整个细胞周期中升高。代表性IF图像显示来自对照或DNAJC9.3 siRNA转染细胞的间期细胞核，免疫染色为CENP-A和EdU。根据EdU和DAPI信号强度将三个生物重复的细胞分为G1、S或G2期，见附录图S3A、B。比例尺:5µm。(D)散点图显示G1、S或G2细胞的核CENP-A强度，如(C)所示。N表示从三个生物重复中分析的每种条件下的细胞总数，并显示标准差(SD)的平均值。P值采用单因素方差分析，采用Tukey 's特设检验。

DNAJC9的缺失稳定了CENP-A并有助于其在染色质中的富集

图3 DNAJC9缺失导致HeLa YFP-CENP-Alow细胞中CENP-A和CIN的错定位。

(A)在DNAJC9缺失的HeLa YFP-CENP-Alow细胞中，CENP-A错定位。siNeg或si DNAJC99.3转染的HeLa YFP-CENP-Alow细胞中期染色体扩散免疫染色的代表性图像。比例尺:15µm。插页比例尺:1µm。(B)散点图显示(A)中描述的在三个生物重复的着丝粒或非着丝粒区域校正背景的CENP-A强度。中位数如图所示。每个圆圈代表单个染色体的值。Chrs是指从三个生物重复中测量的每个条件下的染色体总数。显示了三个生物重复的所有测量值的平均值和标准差。P值采用Mann-Whitney U检验计算。(C)在DNAJC9缺失的HeLa YFP-CENP-Alow细胞中，CENP-C错定位。siNeg或siDNAJC9.3转染细胞中期染色体扩散的代表性图像免疫染色为CENP-C和CENP-A。比例尺:15µm。插页比例尺:1µm。(D)散点图显示(C)中描述的在三个生物重复的着丝粒或非着丝粒区域校正背景的CENP-C强度。中位数如图所示。每个圆圈代表单个染色体的值。Chrs是指从三个生物重复中测量的每个条件下的染色体总数。显示了三个生物重复的所有测量值的平均值和标准差。P值采用Mann-Whitney U检验计算。(E)在DNAJC9缺失的HeLa YFP-CENP-Alow细胞中，着丝点处的NUF2水平降低。上图:固定细胞免疫荧光图像的代表性图像，显示转染siNeg或siDNAJC9.3的中期细胞中NUF2和CENP-A的定位。比例尺:5µm。下图:散点图显示着丝点处的NUF2强度，经背景校正。从三个生物复制中分析了指示的细胞数量，每个圆圈代表单个着丝点的值。kTs是指从三个生物重复中测量的每个条件下的着丝点总数。显示了所有测量值的平均值和标准差。P值采用Mann-Whitney U检验计算。(F, G) HeLa YFP-CENP-Alow细胞中CIN表型发生率增加。代表性IF图像显示，在DNAJC9缺失的HeLa YFP-CENP-Alow细胞中，微核(F)和染色体分离缺陷(G)由白色箭头表示。比例尺:15µm。条形图显示了转染对照(siNeg)或siDNAJC9.3的细胞中微核细胞(F)和染色体分离缺陷细胞(G)的百分比。3个生物重复绘制均数与标准差，P值采用非配对t检验计算。N表示每种情况下分析的细胞总数。

DNAJC9的缺失促进了CENP-A与H3-H4核小体组装途径的关联

图4 DNAJC9的缺失稳定了CENP-A并有助于其在染色质中的富集。

(A)在DNAJC9缺失的HeLa YFP-CENP-Alow细胞中，CENP-A转录物水平没有改变。柱状图显示对照细胞和DNAJC9缺失细胞中标准化为GAPDH的CENP-A和DNAJC9的平均RNA水平。绘制3个生物重复的均值和标准差，采用Sidak多重校正检验的双因素方差分析计算P值。(B) YFP-CENP-A在DNAJC9缺失的HeLa YFP-CENP-Alow细胞中稳定性更高。全细胞提取物的Western blot结果显示，对照组或DNAJC9缺失细胞在指定时间段内经100µg/ml环己亚胺处理后，DNAJC9缺失细胞的DNAJC9缺失和YFP-CENP-A水平。以α -微管蛋白作为上样对照。(C) b所示结果的折线图，绘制三个生物重复的平均值和标准差。(D)从DNAJC9缺失的HeLaYFP-CENP-ALow细胞的染色质组分中富集CENP-A。从对照细胞或DNAJC9缺失细胞制备的可溶性和染色质组分进行Western blot，显示HeLa YFP-CENP-ALow染色质上的YFP-CENP-A和内源性CENP-A水平。α -微管蛋白和H2B分别作为可溶性和染色质部分的标记物。(E)条形图显示在指定条件下染色质上YFP-CENP-A或内源性CENP-A归一化至H2B对照的水平。从三个生物重复中绘制平均值和标准差。P值采用非配对t检验计算。

MCM2有助于DNAJC9缺失细胞中CENP-A的错误定位

图5 在DNAJC9和CAF1B缺失后，CENP-A在可溶性和染色质组分中相互作用。

(A)(左)可溶性和无染色质标记的CENP-A-Flag-HA IP-MS实验概述，由于缺乏敲除，siDNAJC9生物重复2次被省略。中:从表达CENP-A-Flag-HA (DOX +)和未诱导对照(无DOX)的细胞中提取siRNA后进行可溶性和染色质提取物的Western blot检测。以Alpha-Tubulin和H4分别作为可溶性和染色质组分的上样对照。右图:染色质提取物中的酶消化水平。siDNAJC9为n = 4个生物重复，其他条件为n = 5个生物重复。(B, C)来自可溶性和染色质部分CENP-A-Flag-HA IP-MS实验的气泡图，封闭的圆圈代表显著的变化，通过双侧T检验进行评估。B组的统计参数为S0 = 0, FDR = 0.01，最小Log2倍变化为1.5;C组的统计参数为S0 = 0.1, FDR = 0.05。人类UniProt蛋白质识别代码所引用的蛋白质。另见图中详细的数据分析步骤。EV2、EV3和数据集EV4，以及图EV4和数据集EV4中的基因本体分析。(B)与未诱导CENP-A- FLAG- HA的对照条件相比，siRNA处理条件下与可溶性和染色质结合的CENP-A相关因子的富集(DOX-)。使用原始无标签量化强度(LFQ)计算比率。(C)与siCTRL条件相比，siDNAJC9和siCAF1B条件下与CENP-A-Flag-HA特异性相关的蛋白质的富集(红色)和缺失(蓝色)。根据比率归一化无标记量化强度(LFQB.N.)计算的比率。

催化失活的DNAJC9和错误调控的H3-H4供应促进了CENP-A的错误定位

图6 MCM2有助于DNAJC9缺失细胞中CENP-A的错误定位。

(A)    使用或不使用MCM2缺失的对照细胞或DNAJC9缺失的细胞制备的全细胞提取物的Western blot显示，在HeLa YFP-CENP-Alow中，DNAJC9和MCM2缺失的效率。以α -微管蛋白作为上样对照。显示了三个生物复制的代表性图像。(B) MCM2缺失抑制了DNAJC9缺失的HeLa YFP-CENP-Alow细胞中CENP-A的错误定位。在三个生物重复中，对照或DNAJC9.3 siRNA转染的细胞中，MCM2缺失或未缺失的HeLa YFP-CENP-Alow中，中期染色体扩散免疫染色的代表性图像。比例尺:15µm。插入比例尺:5µm。(C)散点图显示在着丝粒或非着丝粒区域的背景校正后的CENP-A强度，如b所述。每个点代表来自单个染色体的值。Chrs表示从三个生物重复中测量的每个条件的染色体总数。红色水平线表示平均信号强度，误差条表示三个生物重复的所有测量值的标准差。P值采用单因素方差分析，采用Tukey 's特设检验。

在DNAJC9缺失后，观察到全基因组的CENP-A错定位

图7 催化失活的DNAJC9以H3依赖的方式促进CENP-A错定位

DNAJC9结构域的组织示意图，以及用红色指针标记的J结构域和/或组蛋白结合结构域(HBD)的突变位点。WT野生型DNAJC9, J突变型DNAJC9 J结构域突变，4A突变型DNAJC9组蛋白结合结构域突变，4AJ型DNAJC9组蛋白结合和J结构域突变。(B)在表达无催化活性J突变体的细胞中观察到核CENP-A水平升高。用(A)中所述的构建物瞬时转染72小时后，来自三个独立实验的HeLa YFP-CENP-Alow细胞的免疫荧光图像显示细胞核CENP-A水平。比标条:15µm。(C)散点图显示了(A)中所述条件下的核CENP-A强度。图下显示了三个生物重复中每种条件下分析的细胞总数。平均与标准差(SD)显示。P值采用单因素方差分析，采用Tukey 's特设检验。

图8 全基因组CUT&RUN分析显示，在缺失DNAJC9的RPE1细胞中，CENP-A错定位于非着丝粒区域。

(A) CENP-A CUT&RUN峰密度核图，代表对照(蓝色轨迹)和处理RPE1-Tet-GFP-CENP-A细胞的siDNAJC9(红色轨迹)中鉴定的CENP-A的分布。该图表示每种条件下两个生物重复的平均值。(B)两个生物重复中对照(siNeg)和经DOX处理的RPE1-Tet-GFP-CENP-A细胞中缺乏DNAJC9的细胞通过CUT&RUN测序鉴定出的峰相关基因(N = 9253)的热图。每个条件的读取密度(z-score归一化)显示在热图上方，并以DNAJC9缺失细胞中鉴定的CENP-A峰的中点为中心。(C)饼状图，表示在DNAJC9缺失的CENP-A CUT&RUN数据集中发现的17,341个显著共同峰在指定基因组特征上的分布。(D)热图显示了与对照细胞(siNeg)相比，DNAJC9缺失细胞中显著富集的CENP-A CUT&RUN峰的折叠变化，计算了与各种表观遗传标记相关的基因组位点。(E)读取密度图显示在指定条件下识别的CENP-A CUT&RUN峰与先前发表的ATAC-Seq实验的峰重叠(GSM6383021)。图以确定的峰的中点为中心。

组蛋白H3变体CENP-A在着丝粒的沉积对于维持着丝粒染色质的完整性和染色体准确的分离是必不可少的。对出芽酵母、裂变酵母、果蝇和人类细胞的研究表明，过表达的CENP-A错定位于非着丝粒区域会导致CIN。尽管有这些观察结果，促进或防止CENP-A错误定位的蛋白质在很大程度上仍然不确定。本研究中提出的全基因组RNAi筛选首次全面鉴定了改变核CENP-A水平的基因耗尽，从而改变了CENP-A的定位。在增加核CENP-A强度的基因缺失中，RNAi筛选发现了多个调节组蛋白H3沉积的候选基因(CHAF1A, CHAF1B, EP400, TRRAP, NASP, DNAJC9)，这表明维持H3-H4稳态对于防止CENP-A错定位至关重要。在这里，作者定义了热休克蛋白和H3-H4共同伴侣DNAJC9在防止CENP-A和CIN错定位中的新作用。对DNAJC9缺失细胞中CENP-A相互作用组的分析强调了组蛋白伴侣MCM2在促进CENP-A错定位中的作用。作者提供了对CENP-A错定位模式的机制见解，并表明DNAJC9的催化活性是防止CENP-A错定位所必需的。作者提出，由组蛋白伴侣如DNAJC9调节的H3-H4供应链的完整性可以防止CENP-A混杂进入异常沉积途径和CIN。

DNAJC9是该筛选的主要候选物质之一，它调节H3-H4的折叠和供应。作者观察到在细胞周期的所有阶段，DNAJC9缺失的细胞中细胞核CENP-A强度增加。此外，DNAJC9缺失的细胞表现出CENP-C错定位到非着丝粒区域，着丝点上的NUF2水平降低，以及以微核、后期桥和滞后染色体为特征的CIN表型。综上所述，这些结果表明，天然着丝点结构的缺陷可能有助于DNAJC9耗竭后的CIN。先前的研究表明，表达显性阴性DNAJC9突变体的HeLa细胞表现出有丝分裂缺陷，包括多极纺锤体形成和染色体错分离;然而，这些表型的机制基础尚未明确。总之，这些发现表明，适当的DNAJC9功能可以防止CENP-A和CIN的错误定位。

通过相互作用组分析，作者提供了在DNAJC9缺失的细胞中，CENP-A错定位的机制。作者的数据显示，在DNAJC9耗散后，参与DNA复制耦合核小体组装的伴侣蛋白如TONSL和MCM2与CENP-A富集。MCM2伴侣蛋白是新的可溶性组蛋白，并在复制叉的亲本组蛋白循环中发挥作用。同时，在组蛋白供给过程中，TONSL作为新的组蛋白H4尾部的读取器。MCM2和TONSL以组蛋白依赖的方式相互作用，是DNAJC9的组蛋白合作伙伴。有趣的是，作者观察到可溶性CENP-A与染色质结合的CENP-A相比，在DNAJC9耗尽后，这些因子的富集程度更高。MCM2还可以与HJURP在共伴侣复合物中结合CENP-A - H4，其部分功能是在DNA复制后促进着丝粒CENP-A的重组。作者的数据表明，MCM2与DNAJC9的共耗尽抑制了CENP-A的错定位。

因此，虽然MCM2有助于非着丝性CENP-A的再循环似乎是合理的，但作者的数据支持新组蛋白H3-H4供应途径保真度的丧失是DNAJC9耗尽时导致CENP-A错定位的主要因素。作者的研究结果加强了这一概念，即在表达催化活性不强的DNAJC9突变体的细胞中增加了CENP-A错定位。J突变体可以结合H3 - H4，但不能招募和刺激HSP70来催化适当的折叠，导致H3和H4作为非生产组蛋白供应中间体积累在可溶性部分。因此，DNAJC9J突变体的表达可能通过减少适当折叠的H3-H4池，从而增加H3-H4组蛋白伴侣的可用性，从而有利于CENP-A沉积到非着丝粒染色质上。此外，在H3.3表型DNAJC9功能缺失的情况下，观察到CENP-A的错误定位。总之，这表明H3-H4供应缺陷促进了CENP-A的错误定位，从而导致组蛋白供应链保真度的丧失，从而驱动CIN，这可能与肿瘤发生有关。

与CENP-A在DNAJC9缺失时进入DNA复制偶联核小体组装途径的能力类似，作者还观察到CENP-A与异染色质形成和维持(例如DAXX-ATRX和NuRD复合体)、转录(例如SPT2和FACT复合体)、DNA损伤信号传导/修复(TONSL和PARP1)以及DNA拓扑(TOP2A和TOP2B)相关的途径增强。在这些因素中，DAXX先前被认为与促进CENPA错定位有关。因此，似乎有几种途径可以促进CENP-A的错误定位，这表明CENP-A沉积在某种程度上是机会性的。正如作者在这里所证明的，CENP-A错定位可能受到多种组蛋白供应链缺陷的影响，包括H3-H4供应减少和DNAJC9指导的蛋白质折叠活性的取消。

在DNAJC9缺失后，在RPE1细胞中也观察到过表达的CENP-A错定位，这表明这种表型并不局限于转化细胞。据报道，p53功能的丧失会上调CENP-A水平，并影响过表达CENP-A的细胞从上皮状态向间质状态的转变。作者的数据表明，DNAJC9的缺失与CENPA mRNA水平的变化无关，而是在蛋白质水平上增加了CENP-A的稳定性。这可以解释为什么在p53缺陷细胞(HeLa)和p53活性细胞(RPE1)中都观察到DNAJC9缺失时CENP-A的错误定位。全基因组分析显示，在缺失DNAJC9的RPE1细胞中，富集的CENP-A位点与转录活跃和开放的染色质区域重叠，正如先前对HeLa和SW480细胞系的研究所报道的那样。这些结果强调了CENP-A错定位存在多种途径，如前所述，结合H3.1/2/3-H4的DNAJC9对与DNA复制和转录相关的组蛋白供应链平衡有很强的影响。

总之，作者已经定义了新的CENP-A错定位调节因子，并描述了DNAJC9组蛋白H3-H4伴侣功能在预防CENP-A错定位和CIN表型中的作用。作者提出了一个模型(图9)，表明在无扰动的H3-H4供应条件下，CENP-A的定位仅限于着丝体区域。siRNA介导的缺失或催化无活性J突变体的表达导致DNAJC9功能丧失，导致CENP-A错定位到非着丝粒区域。DNA复制相关的组蛋白伴侣MCM2在缺乏DNAJC9的情况下促进异位CENP-A沉积。CENP-A的全基因组错定位驱动CIN表型，其特征是微核和有丝分裂染色体分离缺陷。作者的数据支持先前的研究，表明组蛋白变异供应链通过组蛋白伴侣网络相互连接，这里作者强调DNAJC9是促进该网络中组蛋白特异性保真度的关键因素。通过提供这一功能，作者证明了DNAJC9可以阻止CENP-A混杂进入H3-H4沉积途径，从而阻止CIN，这是许多癌症的已知标志。总之，作者的研究强调了如何扰乱组蛋白供应链和组蛋白伴侣网络之间的平衡可以对染色质组织产生主要的下游后果。