https://doi.org/10.1111/vcp.13209
从颈静脉或头静脉采集血液并将其放入 EDTA 中以进行 CBC，并放入无添加剂的红顶管中以测量血清铁、TIBC 和 % 饱和度。然后用右美托咪啶和丙泊酚对狗进行麻醉，对肱骨近端进行手术准备，并使用 14 或 16 号 Jamshidi 针头将骨髓抽吸物样本收集到 EDTA 中。使用利多卡因、布托啡诺、卡洛芬和加巴喷丁进行手术和术后镇痛。根据病史和体格检查，对照组狗被视为健康。排除标准包括以下任何血液值超出 UTVMC 临床病理实验室建立的参考区间：血清铁、TIBC、% 饱和度、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、绝对网织红细胞计数、CHr、血小板（除非凝结）以及分叶中性粒细胞、杆状中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的绝对浓度。如果骨髓小粒数量不足以充分评估骨髓铁储量，也会将狗排除在外。足够的样本定义为具有至少 7 个骨髓小粒，每个颗粒平均占据低倍显微镜视野（10 倍物镜）的大部分。或者，如果样本中含有较多较小的骨髓小粒，那么也是可以接受的，前提是估计骨髓小粒的总面积在低倍镜下占据了 7 个视野的大部分。
在 CUHA 使用 Cobas 501 化学分析仪测量了健康对照犬和大多数临床患病犬的血清铁、TIBC 和百分比饱和度。
作为 CUHA 对骨髓样本进行标准诊断评估的一部分，根据 CUHA 临床病理实验室标准操作程序，用普鲁士蓝对一份骨髓抽吸涂片进行染色。简而言之，用甲醇固定载玻片 10 分钟。在蒸馏水中冲洗后，将载玻片放入新鲜配制的等份 10% 亚铁氰化钾和 20% 盐酸溶液中孵育 10 分钟，然后在蒸馏水中冲洗。最后，用 1% 番红浸渍载玻片 10 秒钟进行复染，用蒸馏水冲洗，然后风干。
为了消除不同实验室普鲁士蓝染色可能产生的偏差，UTVMC 健康对照犬的骨髓样本被运送到 CUHA 临床病理实验室进行染色，染色程序与临床患病犬的相同。此外，还附有一张阳性对照载玻片，即之前已确认骨髓铁在显微镜下可见的犬骨髓抽吸涂片。
骨髓铁评分与 CHr 联合应用对铁限制性红细胞生成分类的评估
我们对每只狗的医疗记录、CBC 和生化结果进行了评估，以确定 CHr 和骨髓铁评分同时下降的狗是否比只有一个值下降或两个值都没有下降的狗有更多绝对缺铁指标。因为没有诊断绝对缺铁的黄金标准，所以本次比较的绝对缺铁指标为：MCV、MCH、MCHC、血清铁或 % 饱和度下降；TIBC 增加；或医疗记录中记录了导致绝对缺铁的状况，特别是外部失血或疑似营养缺乏的报告。
数据分析采用每位患者四位观察员的骨髓铁中值评分，骨髓铁减少有两种定义，一种是 (1) 中值评分 <1，表示可染色骨髓铁缺失或几乎缺失，另一种是 (2) 中值评分 <3，即在未检测到血液学异常的狗中观察到的最低评分。CHr 减少是使用测量样本的实验室的参考下限确定的，CUHA 为 <24.5 pg，UTVMC 为 <23.5 pg。
结论：本研究的目的是为犬类骨髓样本中铁储量的解释提供指导。我们建议将这种针对犬骨髓抽吸物的铁评分系统与外周血 CHr 评估结合使用，以评估铁缺乏情况。正如预期的那样，CHr 降低且铁评分 <1 的狗通常有其他证据支持铁缺乏。对少量骨髓铁（评分为 1 或 2）导致的 CHr 降低的解释尚不清楚，尤其是考虑到在评分 <3 的狗亚组中，观察者间的一致性较低。
