https://doi.org/10.1111/j.1939-165X.2006.tb00144.x
摘要
背景：虽然反复冻融循环对犬血浆成分的影响尚未在犬身上进行过评估，但这种程序在常规实验室实践中并不罕见。目的：评估冻融循环对健康犬常规血浆成分的影响。方法：使用六只健康成年犬。采集血液样本并放入肝素化试管中。离心后，将血浆分成 5 份。一份被视为参考份，并立即用于测定所有生化成分。所有其他份均储存在 −20°C 下。三份在 1 至 3 天内经历了 1、2 或 3 次冻融循环。最后一份在整个研究过程中保持在 −20°C 下，并在第三天解冻。测定了以下生化成分：葡萄糖、尿素、肌酐、总蛋白、钠、钾、氯、钙、磷酸盐、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、肌酸激酶 (CK) 和碱性磷酸酶 (ALP)。结果：在所有成分的不同等分试样之间未观察到临床相关变化。结论：反复冻融循环不会导致犬血浆中研究的生化成分发生变化。
背景：在兽医临床病理学中，通常建议将 1 份血浆深度冷冻（一般在 −20°C）以供进一步研究或重复检测（如发现异常值或随访患者）。已记录了这种储存时间和温度对血浆和血清成分的影响。在 −20°C 或 −70°C 下储存8 个月期间，大多数分析物没有变化（脂肪酶、白蛋白、胆红素、葡萄糖、钾、总蛋白、钠或甘油三酯）或变化非常轻微（碱性磷酸酶 [ALP]、丙氨酸氨基转移酶 [ALT]、天冬氨酸氨基转移酶 [ASP]、肌酸激酶 [CK]、钙、胆固醇、肌酐、磷酸盐或尿素）。相反，已发现淀粉酶、γ-谷氨酰转移酶、谷氨酸乳酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、胆汁酸、果糖胺和镁会发生可能具有临床重要性的变化（酶的变化 > 20%，代谢物和矿物质的变化 > 10%），具体取决于储存时间和温度。通常，如果解冻了血浆，建议在使用后丢弃，因为反复的冻融循环可能会改变血浆中成分的浓度，但实际上许多研究人员会重新冷冻血浆。此外，过去十年用于研究目的的血浆库的发展也强调了更好地记录冻融循环的潜在影响的必要性。尽管将反复冻融的潜在不利影响（如果有的话）降至最低的一种替代方法是保存同一份血浆的几份，但这种方法操作起来很繁琐，需要更大的储存空间，这可能是许多设施中长期的关键因素。使用已经历 1 次或多次冻融循环的血浆很常见。然而，从未有记录显示反复冻融循环对狗血浆成分的影响。在人类样本中，反复冻融循环不会影响葡萄糖和总蛋白的浓度。最近的一项研究表明，在 −70°C 下反复冷冻和解冻对健康成年志愿者血浆/血清胆固醇、微量营养素和激素浓度的影响有限。本研究旨在记录短时间内反复冻融循环对健康狗常规血浆成分的影响。
方法：使用了六只成年实验比格犬（Harlan，03800 Gannat，法国），禁食 12 小时。每只狗单独饲养在图卢兹兽医学院的设施中，该设施经法国农业部批准并符合动物护理和使用指南。根据身体检查结果和血浆生化小组的结果，这些狗被认为是健康的。从每只狗的颈静脉抽取 10 毫升血液并立即放入肝素化的试管中。在取样后 30 分钟内进行离心（3000 g，10 分钟）后，将血浆分成 5 个等分试样（每个等分试样约 0.8 毫升）给每只狗。一个等分试样（参考等分试样）立即用于检测。另外 4 个等分试样（等分试样 2、3、4 和 5）立即冷冻在 −20°C 下。24 小时后，将每只狗的 2、3 和 4 份样本在室温（20°C）下解冻 30 分钟。2 份样本用于检测（然后丢弃），3 和 4 份样本重新冷冻。48 小时后，按照相同程序检测 3 份样本，4 份样本重新冷冻。72 小时后，4 份样本解冻并检测。等分试样 5 用作另一个对照，以评估在 −20°C 下储存的效果：在 3 天内将其保持深度冷冻，在 72 小时时解冻，并与等分试样 4 同时进行测定。使用 Vitros 250（Ortho Clinical Diagnostics，法国伊西莱穆利诺）测定以下生化成分：葡萄糖、尿素、肌酐、总蛋白、钠、钾、氯化物、钙、磷酸盐、AST、ALT、CK 和 ALP。总共进行了 390 次测定（6 只狗、5 个等分试样和 13 种成分）。使用以下一般线性模型对每种血浆成分进行统计分析（Systat 10.2，SPSS Inc，美国伊利诺伊州芝加哥）：
其中 Y ij是狗 i（i = 1 至 5）在等份 j（j = 1 至 5）中的测量值。等份 1、2、3、4 和 5 分别对应于新鲜血浆、1、2 和 3 次冻融循环以及在 −20°C 下储存 3 天且仅解冻一次的血浆。模型误差用术语 e ij描述。当观察到统计学上显著的等份效应时，进行多次成对比较。
列出了所有狗的所有血浆成分的平均值 ± SD 值（表 1）。未检测到血浆成分对血浆肌酐、总蛋白、AST、CK 或 ALP 值的显著影响。血浆成分 5（即储存在 −20°C 下并仅解冻一次的血浆）与其他血浆成分之间的显著差异为：血浆葡萄糖 ( P < .001)、尿素 ( P < .001)、钠 ( P < .01)、钾 ( P < .01) 、氯化物 ( P < .001 )、钙 ( P < .001) 和磷酸盐 ( P < .001) 浓度以及 ALT 活性 ( P < .01)。单个样本的新鲜血浆中观察到的最大差异（变化百分比）不被认为具有临床意义，并且不会导致对结果的误解。但本研究的一个主要限制是数值范围有限且对应于生理值。这些结果不能外推到血浆成分的更高值。
结论：这项研究的结论是，短时间内对健康犬血浆进行反复冻融循环不会导致血浆生化成分发生临床显著变化。储存时间可能比冻融循环次数更重要。
