点击上方蓝色文字进行关注抗体偶联药物（Antibody-Drug Conjugate）的简要历史近两年ADC技术快速发展，目前约有60种ADC正在进行临床试验（Diamantis and Banerji, 2016）。除了免疫检查点抑制剂的免疫疗法（Postow et al., 2015），这种新兴的化疗分子平台预计将显著增加其市场份额，成为近期最有效的抗癌疗法之一（Mullard, 2013）。本期小编将给大家介绍ADC偶联药物的原理，偶联方法和连接子（Linker）化学进展，想学习ADC的童鞋一定要看哦！非常易懂！ADC的结构和作用机制ADC由单克隆抗体和细胞毒素（有效载荷）通过化学链接物共价偶联而成（图1A）。在ADC的现代研究和开发中，人源化或完全人源化单克隆抗体（hmAbs）是传递平台的首选，以确保高细胞靶向特异性、在人体血液中的长循环半衰期（在免疫球蛋白G（IgG）的情况下长达三周），以及最小的免疫原性。
鉴于其作用机制，理想的抗体需要具有足够的抗原亲和力和特异性。然而，已知具有极高抗原亲和力的抗体会导致实体肿瘤穿透效率降低（Rudnick et. al., 2011）。因此，具有高抗原亲和力的ADC并不一定导致高临床疗效。此外，细胞表面抗原必须主要在目标细胞上表达，而在健康细胞上的表达最小，以实现有效的药物输送和选择性杀死肿瘤细胞，这决定了治疗窗口。在这种情况下，人们可能会认为肿瘤抗原密度直接与ADC的疗效相关。然而，几项研究表明，抗原密度与ADC疗效之间的相关性取决于癌细胞的类型（Polson et al., 2011; Kung Sutherland et al., 2013），因为与ADC分子形成复合物后每种抗原的内化率不同。虽然选择癌细胞特异性抗原很重要，但基于抗原表达水平预测ADC的总疗效仍然不清楚（Damelin et. al., 2015）。另一个重要考虑因素是可以有效输送到目标细胞的有效载荷分子数量有限。如果假设ADC机制中每一步的效率为50%（生物分布、与抗原结合、内化、有效载荷的释放、细胞内有效载荷的稳定性和有效载荷与靶标的结合），则只有1.56%的给药分子可以进入目标细胞（Teicher and Chari, 2011）。实际上，估计实际摄取量比这个假设要低得多（每克肿瘤注射剂量<0.01%）（Sedlacek et al., 1992）。因此，为了最大限度地利用ADC提高治疗效果，需要有效载荷的细胞毒性足够强，以有效地根除目标细胞，理想情况下在皮摩尔范围内。虽然选择高毒性有效载荷很重要，但理想的药物应具有固有的对目标癌细胞的选择性。某些类型的非癌细胞可能能够通过非特异性胞饮作用或片段结晶（Fc）区域受体介导的内吞作用内化ADC。此外，有效载荷可能在降解后释放到循环血液中。因此，主要基于上述考虑选择有效载荷；抗有丝分裂剂，通常对非癌细胞的毒性小于对癌细胞的毒性，是FDA批准的ADC和临床试验中ADC主要使用的有效载荷。除了在Mylotarg®中使用的卡利霉素（calicheamicins）、在Adcetris®中使用的奥瑞他汀（auristatins）和在Kadcyla®中使用的美登素（maytansinoids），还探索了新的高毒性抗有丝分裂化合物类别作为ADC有效载荷：如二氢青霉素（duocarmycins）、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体（PBDs）、鹅膏素（amanitins）和微管蛋白抑制剂类似物（tubulysin analogs）等（Chari et al., 2014; Perez et al., 2014）。
图片来源：Protein Cell ADC的偶联和链接（Linker）化学尽管根据癌细胞类型选择最佳目标特异性抗体和有效载荷很重要，但偶联和链接化学也是成功构建ADC的关键组成部分。链接物（Linker）通过共价键将抗体和有效载荷组分连接起来。其分子设计和属性是ADC疗效的关键决定因素，涉及药代动力学（PK）/药效学（PD）和治疗窗口。为了最大化这些参数，已经开发并评估了各种类型的链接物。成功的ADC构建必须满足以下几个标准：（1）链接物需要在血浆中具有足够的稳定性，以便ADC分子可以在血流中循环并定位到肿瘤部位，而不会过早断裂。链接物的不稳定性会导致有毒有效载荷过早释放，对非目标健康细胞造成不必要的损害，可能导致系统毒性和不良反应。然而，一项临床研究表明，基于美登素的ADC的链接物稳定性与不良毒性呈负相关（Drake and Rabuka, 2015）。因此，对于每种组合的抗原、目标肿瘤类型和有效载荷，识别具有最佳链接物稳定性的ADC链接物非常重要。（2）链接物需要具有在ADC内化到目标肿瘤细胞后迅速被切割并释放自由和有毒有效载荷的能力。（3）在链接物设计中要考虑的另一个属性是疏水性。与疏水有效载荷结合的疏水链接物往往会促进ADC分子的聚集。例如，King等人观察到通过多载荷、疏水二肽链接物将单克隆抗体BR96与阿霉素偶联，会发生非共价二聚化（King et al., 2002）。这种分子在追求治疗上有用的ADC中是不受欢迎的；聚集的蛋白质倾向于在肝脏中迅速被隔离并通过网状内皮系统清除，导致肝毒性（Finbloom et al., 1980）。此外，聚集的蛋白质可能作为免疫原性物质，在血流中循环时引发不必要的免疫反应。这个问题可以通过使用含有负电荷磺酸基团（Zhao et al., 2011）、聚乙二醇（PEG）基团（Lyon et al., 2015）或焦磷酸二酯基团（Kern et al., 2016）的亲水链接物来克服。基于上述标准，已经投入了巨大的努力来开发偶联方法和ADC链接物结构。化学偶联和酶促偶联是目前使用的将抗体和有效载荷组分连接起来的两种方法。链接物结构根据有效载荷释放机制分为两大类：可切割或不可切割链接物。化学偶联在ADC化学偶联中，抗体表面的可接近氨基酸残基与链接物上安装的反应手柄进行控制反应。根据所选的化学偶联方法，这个过程会产生具有不同药物-抗体比（DARs）和连接位点的ADC物种混合物。通常，DAR的广泛分布会导致疗效降低，因此需要严格控制分布。高DAR不仅可以增加效力，还可以增加聚集、清除率和在循环期间过早释放有毒有效载荷的风险。通过使用亲水性、足够稳定的链接物，可以降低这种风险。总体而言，对于每种ADC，关键是确定一个最佳的DAR值和控制分布，以最大化疗效、耐受性和细胞毒性特性的平衡。赖氨酸酰胺偶联酰胺偶联是主要的ADC偶联方法，将有效载荷与抗体上的溶剂可及赖氨酸残基通过含有活化羧酸酯的链接物连接起来（图3）。胺和活化羧酸之间的酰胺偶联是有机合成中最可靠、高产的化学转化之一。然而，典型的抗体上有大约80个赖氨酸残基，其中约10个残基是化学上可接近的（Chari, 2008）。因此，这种偶联方式通常会产生多个具有可变DARs和偶联位点的ADC物种。在美登素型ADC的情况下，平均DAR为3.5-4，分布为0-7（Lazar et al., 2005）。如上所述，DAR及其分布对ADC的PK/PD和细胞毒性至关重要。此外，一些关键于抗体-抗原相互作用的赖氨酸残基可能会发生修饰，导致结合亲和力降低。因此，使用这种偶联方法构建的异质ADC混合物可能会导致治疗效果不佳。虽然像FDA批准的Kadcyla®和临床测试的ADC一样是可行的，但基于赖氨酸的偶联需要努力开发可重复的制造过程，确保DAR和分布控制在目标范围内（通常主要物种为3-4）。图片来源：Protein Cell 半胱氨酸偶联半胱氨酸基偶联方法依赖于抗体上的半胱氨酸残基（巯基）与安装在有效载荷上的巯基反应性功能团之间的特定反应（图4A）。通常，抗体不具有游离巯基，所有半胱氨酸残基形成二硫键。在现代ADC中最常用的人IgG1中，有4个链间和12个链内二硫键。4个链间二硫键通常对IgG1的结构稳定性不是至关重要的，可以在温和条件下选择性还原，以产生2、4、6或8个游离巯基，同时保持12个链内二硫键完整。由于偶联位点数量有限，且巯基的反应性独特，半胱氨酸基偶联在控制DAR和异质性方面优于基于赖氨酸的偶联。正如赖氨酸基偶联的情况一样，这种偶联方法也是ADC构建的主要选择，并用于Adcetris®和许多其他临床试验中的ADC。然而，这种方法仍有改进空间，以实现更好的DAR和异质性控制：上述简单的半胱氨酸偶联可以产生从0到8的DAR分布。Junutula等人引入了两个新的半胱氨酸残基（每个重链一个）用于选择性抗体附着（Junutula et al., 2008）。这种工程化的半胱氨酸技术，THIOMAB，能够产生高度均质的ADC，DAR为2（>90%的均质性）。使用这种技术构建的ADC在体内研究中显示出相当令人鼓舞的结果（高疗效和治疗窗口）。半胱氨酸重桥联是最近开发的一种策略，以更好地控制ADC的DAR和异质性。二溴丙二酰亚胺（Behrens et al., 2015; Bryden et al., 2014）、二溴吡嗪二酮（Maruani et al., 2015）和基于1,3-双（对甲苯磺酰基）丙烷的核心（Bryant et al., 2015）可以接受来自链间二硫键的两个还原半胱氨酸，形成重桥联抗体（图4B）。这些位点特异性偶联理论上在结构稳定性、均质性和良好控制的DAR（在二溴丙二酰亚胺的情况下主要为4）方面提供了许多优势。结合选择合适的链接物结构和有效载荷，这种方法有潜力产生具有增强PK/PD和疗效的ADC。最近，Buchwald等人开发了一种快速、高选择性的半胱氨酸偶联，使用芳基钯复合物（Vinogradova et al., 2015）（图4C）。芳基钯试剂是通过混合活性钯-膦复合物和各种芳基卤化物轻松制备的。得到的复合物与抗体的还原半胱氨酸残基进行硫醇芳基化反应，快速而选择性。他们展示了这种新方法在与曲妥珠单抗和vandetanib（一种激酶抑制剂）的钯复合物直接偶联中的潜力，得到了一个无链接物的ADC，DAR为4.4。尽管获得的ADC缺乏链接物，但它保留了与重组HER2的结合亲和力（Kd = 0.1-0.5 nmol/L），与亲本曲妥珠单抗相当。这种方法的另一个优点是，得到的芳基-半胱氨酸偶联物对酸、碱、氧化剂和外部添加的巯基稳定。虽然独特而有趣，但这种方法需要对几个关键因素进行大量修改或改进，以适应未来的临床应用（钯的毒性、完全去除钯的工作策略、钯复合物的成本、DAR控制等）。尽管存在当前限制，但进一步的工作将为研究人员提供深刻的半胱氨酸基偶联化学见解，并合理设计用于制备传统方法无法构建的ADC的试剂。图片来源：Protein Cell 非天然氨基酸的遗传工程整合通过遗传工程整合非天然氨基酸残基是一种策略，允许位点特异性化学偶联，从而严格控制DARs。Schultz等人开发了蛋白质表达系统（细菌、酵母和哺乳动物细胞），其中对乙酰苯丙氨酸含有一个羰基，通过引入一个独特的密码子-tRNA合成酶进行遗传编码（Axup et al., 2012; Tian et al., 2014）（图5A）。使用这些表达系统生产的工程抗体含有对乙酰苯丙氨酸残基，引入的羰基与含烷氧胺功能化的链接物反应，提供氧化偶联的ADC。其他例子是对甲基-L-苯丙氨酸（Zimmerman et al., 2014）和N6-（（2-叠氮乙氧基）羰基）-L-赖氨酸（VanBrunt et al., 2015）（图5B）。整合的叠氮基团用于与含炔基功能化的链接物偶联，通过铜催化的Huisgen环加成（通常称为“点击化学”）提供三唑链接的ADC。Zimmerman等人使用这种方法将单甲基奥瑞他丁F（MMAF）与曲妥珠单抗偶联，得到了一个有效的ADC（Zimmerman et al., 2014）。抗体序列中的所有官能团都耐受偶联反应。因此，可以通过调整非天然氨基酸的整合程度并充分利用偶联的官能团来严格控制DARs。使用带有非天然氨基酸的抗体的点击化学可以与带有应变的环辛炔功能化的链接物实现生物正交偶联，而不需要细胞毒性的氧化铜催化剂（图5C）。然而，基于非天然氨基酸的方法通常需要特殊的技术和生物制剂进行遗传工程过程，整合的非天然氨基酸残基可能会引发不必要的免疫反应。进一步努力解决这些问题将使这种方法在ADC的工业生产中真正实用和多功能。图片来源：Protein Cell 酶促偶联几种酶已被用于将天然或遗传工程化的抗体与有效载荷偶联，或在抗体框架上安装独特的反应手柄，以便后续的化学偶联。这些酶以位点或氨基酸序列特异性的方式修饰抗体。此外，天然mAbs中的反应位点或遗传引入的处理位点被设计为与对应的功能团特异性反应。因此，（化学）酶促方法通常允许位点特异性偶联，从而严格控制DARs。使用Sortase A的转肽作用金黄色葡萄球菌的Sortase A识别LPXTG（X：任何氨基酸）基序，切割苏氨酸-甘氨酸（T-G）键，并附加一个含有寡甘氨酸（寡聚-G）的分子。各种货物可以融合到寡聚G上，用于Sortase A介导的偶联：肽、蛋白质、核酸等（Popp et al., 2009; Witte et al., 2012）。例如，Ploegh等人展示了将生物素化的I类MHC限制性表位与含有LPETG-His6序列的抗体对C型凝集素DEC205的抗体进行化学计量和位点特异性偶联（Swee et al., 2013）。得到的偶联物在结合树突细胞后保留了表位生成能力，并能够在体外和体内监测细胞内过程。Beerli等人展示了这种强大的方法在化学计量位点特异性ADC偶联中的潜力（Beerli et al., 2015）（图6A）。他们在各种mAbs的轻链和重链的C末端引入了识别基序LPETG。然后，在Sortase A的存在下，含有五聚甘氨酸的小分子有效载荷单甲基奥瑞他丁E（MMAE）与mAbs偶联。得到的偶联物（DAR：大约3.2，单体含量：>96%）对抗体结合到相应抗原没有不良影响。此外，这些偶联物在体外细胞杀伤活性与使用传统ADC偶联方法（包括FDA批准的ADC Adcetris®和Kadcyla®）生成的相应偶联物相当。这种方法也可用于mAbs衍生的单链可变片段（scFv）的位点特异性偶联（Madej et al., 2012）。图片来源：Protein Cell 使用微生物转谷氨酰胺酶的转肽作用使用细菌转谷氨酰胺酶是将有效载荷位点特异性地整合到抗体中的强大方法（图6B）。来自Streptomyces mobaraensis的转谷氨酰胺酶催化转肽作用，其中含有一级胺的链接物共价连接到去糖基化抗体中特定谷氨酸（Q295）的一级酰胺侧链，从而产生具有定义的DAR为2的ADC（每个重链一个偶联位点）（Jeger et al., 2010; Dennler et al., 2014）。在此偶联之前进行N297Q突变提供了另外两个反应位点（DAR = 4）。这种方法在实际ADC生产中非常有利，因为糖苷酶和转谷氨酰胺酶直接修饰并用有效载荷偶联天然mAbs，无需遗传工程。Strop等人开发了一种使用肽序列特异性转谷氨酰胺酶的替代版本（Strop et al., 2013）。这种酶识别并利用LLQG基序，该基序是遗传整合的，从而实现位点特异性抗体-药物偶联。这种LLQG特异性细菌转谷氨酰胺酶的另一个优点是，可以通过在抗体结构中插入这种短肽基序灵活地布置偶联位点。他们通过准备两种ADC展示了这种策略的潜力，这些ADC显示出严格控制的DARs（∼1.9）和可比的细胞毒性和耐受性特性。图片来源：Protein Cell N-糖基工程Asn297（N297）在Fc结构域内，以及该残基上的N-糖基在所有IgG类别中都是保守的，这使得这些组分成为广泛适用的ADC偶联的有吸引力的反应位点。Zhou等人开发了在N-糖基末端引入醛基的方法，使用β-1,4-半乳糖苷转移酶（GalT）和α-2,6-唾液酸转移酶（SialT）（图6C）（Zhou et al., 2014）。这两种酶在每个N-糖基末端引入唾液酸，随后在温和的氧化条件下使用NaIO4将其转化为醛基。生成的醛基然后用于偶联含氨基氧功能的载荷。在他们的研究中，这种偶联方法得到了平均DAR为1.6，这大约是每个抗体引入的唾液酸残基的数量。不幸的是，使用NaIO4的氧化步骤可以氧化抗体内的蛋氨酸残基，且由于转化率低，DAR分布较宽。图片来源：Protein Cell 另一种方法是将具有正交反应手柄的非天然糖基整合到抗体中。基于这种策略的最新技术之一是由van Delft等人开发的GlycoConnect技术（van Geel et al., 2015）（图6D）。使用内切糖苷酶Endo S2修整Asn297的糖链，然后使用突变的半乳糖苷转移酶GalT(Y289L)和N-叠氮乙酰半乳糖胺（GalNAz）引入叠氮基团。安装的叠氮基团用于与载荷的应变促进点击反应，产生稳定且均质的ADC，严格控制DARs（在大多数情况下主要为2）。这种技术的最大优势是，它提供了一致的结果，不受N-糖基形式异质性的影响，这意味着它可以用于具有各种N-糖基化特征的任何IgG亚型。图片来源：Protein Cell 可切割链接物ADC链接物的一个主要类别是可切割链接物。可切割链接物旨在响应细胞外和细胞内环境（pH、氧化还原电位等）之间的差异或特定溶酶体酶的作用而被切割。在大多数情况下，这类链接物被设计为在键断裂后释放亲本有效载荷分子。这种无痕药物释放机制允许研究人员根据已知的游离有效载荷的药物学参数估计偶联有效载荷的细胞毒性。腙链接物腙是一种酸敏感基团，用作可切割链接物，通过水解在ADC运输到酸性内体（pH 5.0-6.0）和溶酶体（pH约4.8）后释放游离药物（图7A）。嵌合抗体BR96-阿霉素偶联物（BR96-DOX）就是使用腙偶联策略开发的。BR96-DOX被推进到转移性乳腺癌的II期人类临床试验（Tolcher et al., 1999）。与游离阿霉素给药相比，该偶联物的毒性剖面得到了显著改善。然而，由于其低耐受性，胃肠道毒性仍然突出，临床结果并不令人满意。另一个例子是针对CD33抗体的卡利霉素偶联物，Mylotarg®（Linenberger et al., 2001; Sievers et al., 2001）。Mylotarg®显示出令人鼓舞的临床结果，并在2000年获得批准。然而，如前所述，由于缺乏临床显著改善患者结果，它在2010年被撤出市场。这两种不成功的ADC都遭受了毒性和低耐受性的困扰，这似乎归因于腙链接物在循环期间的不稳定性。事实上，带有腙链接物的ADC在生理条件下（pH 7.4，37°C）会发生缓慢的水解，导致有毒有效载荷缓慢释放（Laguzza et al., 1989）。图片来源：Protein Cell 猫肝B响应链接物猫肝B是一种溶酶体蛋白酶，它在各种癌细胞中过度表达，并参与人类许多致癌过程（Gondi and Rao, 2013）。猫肝B具有相对广泛的底物范围，但它优先识别某些序列，如苯丙氨酸-赖氨酸（Phe-Lys）和缬氨酸-瓜氨酸（Val-Cit），并在这些序列的C末端切割肽键。特别是，与对氨基苄氧羰基（Val-Cit-PABC和Val-Ala-PABC）偶联的Val-Cit和Val-Ala链接物是迄今为止最成功的可切割链接物（Dubowchik et al., 2002; Hartley, 2011）（图7B）。通过内吞作用内化并运输到溶酶体后，猫肝B选择性地切割这个链接物，以无痕方式从ADC中释放细胞毒素有效载荷。PABC基团作为Val-Cit基团和有效载荷之间的间隔，允许猫肝B对连接到笨重有效载荷分子（如阿霉素）的链接物发挥其全部蛋白酶活性。这种链接物被用于构建嵌合抗CD30抗体-MMAE偶联物，或布伦图西姆单抗vedotin（Adcetris®）（Younes et al., 2010）。图片来源：Protein Cell 二硫键链接物谷胱甘肽敏感链接物是另一种常见的可切割链接物（图7C）。这种策略依赖于细胞质中还原分子（如谷胱甘肽）的浓度（1-10毫摩尔/升）（Wu et al., 2004）与细胞外环境（血液中约5微摩尔/升）（Mills and Lang, 1996）相比较高。链接物中嵌入了一个二硫键，在循环中抵抗还原切割。然而，一旦内化，丰富的细胞内谷胱甘肽就会还原性地切割二硫键，释放出游离的有效载荷分子。为了进一步提高循环期间的稳定性，通常在二硫键旁边安装甲基（Saito et al., 2003）。这类链接物已被用于Mylotarg®（Sievers et al., 2001），以及最近在几个基于美登素的临床试验候选物中使用（Widdison et al., 2015）。图片来源：Protein Cell 焦磷酸二酯链接物最近，Garbaccio等人开发了一种具有焦磷酸二酯结构的新型可切割链接物（图7D）（Kern et al., 2016）。这种阴离子链接物具有比传统链接物更好的水溶性，并且在循环中具有出色的稳定性。此外，一旦内化，焦磷酸二酯就会通过内体-溶酶体途径迅速被切割，释放出未修饰的有效载荷分子。作者推测焦磷酸二酯经历了两步酶促链接物切割过程，释放出有效载荷-单磷酸分子，然后释放出游离的有效载荷，尽管尚未确定参与此过程的酶。有了这个令人鼓舞的结果，他们开始构建抗人CD70抗体和各种糖皮质激素的偶联物。构建的ADC显示出在人血浆中的巨大稳定性（体外高达7天）和在溶酶体中快速链接物切割和释放游离有效载荷分子。有趣的是，每个偶联物释放游离有效载荷的速率不同，这取决于靠近焦磷酸基团的取代基团。这一结果表明，通过进一步的结构修饰可以微调释放速率。此外，含有丙酸氟替卡松的ADC在CD70阳性786-O细胞中显示出显著的效力（EC50：0.37纳摩尔/升），与游离丙酸氟替卡松相当（EC50：0.25纳摩尔/升）。这些结果展示了焦磷酸二酯链接物在未来开发治疗上实用的ADC中的潜力。图片来源：Protein Cell 不可切割链接物不可切割链接物由稳定的键组成，能够抵抗蛋白水解降解，确保比可切割链接物具有更大的稳定性。不可切割链接物依赖于ADC的抗体部分被细胞质和溶酶体蛋白酶完全降解，最终释放出与降解抗体衍生的氨基酸残基连接的有效载荷分子（图8）。因此，当与不可切割链接物结合时，必须仔细选择和设计有效载荷结构，以便有效载荷以这种修饰形式发挥可比或甚至更好的抗肿瘤效力。为此，可能需要检查带有不可切割链接物的ADC的所有可能代谢物的PK/PD和毒性剖面。使用不可切割链接物的ADC的成功例子是人源化抗HER2抗体-美登素偶联物曲妥珠单抗emtansine（T-DM1，或Kadcyla®）（LoRusso et al., 2011; Verma et al., 2012）。图片来源：Protein Cell 结论和展望在本文中，回顾了ADC的概念和临床潜力，以及构建这一新型分子的各种偶联/链接策略（表1）。与传统的基于小分子的化疗相比，设计良好的ADC具有几个独特的特点和临床优势，包括更可取的PK/PD和生物分布（通常与天然IgGs相似）、更宽的治疗窗口和分子定制的灵活性。正如FDA批准的Adcetris®和Kadcyla®的成功所证明的那样，这种新的治疗方法具有巨大的抗癌治疗潜力，并引起了研究人员和临床医生的极大关注。事实上，ADC技术已经取得了显著进展，目前约有60种ADC正在进行临床试验。这种新兴的分子平台预计在不久的将来将成为抗癌治疗的主流。尽管有潜力，但必须进一步了解ADC的生化、免疫学、药理学和分子方面，以更好地设计和开发有效的ADC。虽然选择目标抗原和有效载荷很重要，但抗体-有效载荷偶联方法和链接化学也是生产成功ADC的关键要素。特别是，链接物的不稳定性和平产品的异质性（即，DARs的广泛分布）通常对ADC的疗效和治疗窗口产生负面影响，这通常导致临床应用优化的困难或限制，最终导致临床试验失败。为了克服这些问题，当前的努力正致力于开发新型稳定链接物（有或没有有效载荷释放机制）和位点特异性偶联方法，以构建均质ADC。沿着这条线的进一步调查将提供更深入的见解和复杂的策略，从药物化学和药理学的角度来看，将导致未来的创新癌症疗法。
