南方医科大学珠江医院小儿血液科原创论文（二）|CRLF2高表达对儿童B细胞急性淋巴细胞白血病预后的影响
文摘
健康
2024-01-15 17:50
广东
（Poor outcome of pediatric B-cell acute lymphoblastic leukemia associated with high level of CRLF2 gene expression in distinct molecular subtypes，DOI 10.3389/fonc.2023.1256054）
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B细胞型急性淋巴细胞白血病（B-ALL）占儿童ALL发生率的85%左右，大约50-60%的费城染色体样亚型（Ph-like）B-ALL患者有细胞因子受体样因子2（CRLF2）过表达，既往文献报道中对CRLF2过表达的定义尚没有统一标准，CRLF2过表达对儿童B-ALL患者预后的预测价值仍存在争议。
近期，南方医科大学珠江医院小儿血液科杨丽华团队在《肿瘤前沿》（Frontier in Oncology）杂志上发表了一项研究，对2020.5~2022.2该团队收治的111例初诊儿童B-ALL患者的临床及分子学资料（中位随访时间为28.6个月，最后一次随访时间为2023.8.25）进行了回顾性分析。发现高二倍体和Ph-like亚型在队列中CRLF2过表达的B-ALL患儿中聚集。使用ROC曲线用CRLF2表达水平分别对高二倍体和Ph-like亚型B-ALL进行预测，选择最佳截断值（CRLF2表达量FPKM值0.2155和6.7304，分别对应该队列CRLF2表达量FPKM值百分位数的52%和94%），将CRLF2表达水平分为低、中、高表达三组。在研究队列中发现Ph-like患者在CRLF2高表达中富集，而超二倍体患者在CRLF2中等表达中富集；CRLF2-高组患者有初始白细胞计数显著较高的特点；CRLF2-中组患者在诱导治疗期间，流式MRD迅速下降，到巩固治疗前评估时MRD持续为阴性，提示预后较好。我们在TARGET队列中验证了CRLF2-高患者预后较差的猜测，CRLF2-高患者与较低的中位生存（OS）和无事件生存期（EFS）显著相关；而CRLF2-中等患者的OS和EFS均优与其他患者。
1.研究队列的临床和分子学特点
研究队列纳入珠江医院小儿血液科B-ALL患儿111例，男67例，女44例，中位年龄为4岁（0-14岁），根据SCCLG-ALL-2016的风险分层SR 13例（12%），IR 36例（32%），HR 61例（55%），1例因放弃治疗而风险评估未完成。利用ALL-Sorts进行分子分型，结果为：DUX（4例，4%）、ETV6-RUNX1（12例， 10%）、ETV6-RUNX1样（2例，2%）、高二倍体（38例，33%）、KMT2A组（9例，8%）、低二倍体（1例，1%）、MEF2D（4例，4%）、NUTM1（2例，2%）、PAX5 P80R（1例，1%）、PAX alt（5例，5%）、Ph+（4例，4%）、Ph-like（5例，5%）、TCF3-PBX1（11例，10%）、ZNF384（1例，1%）、未分类（13例，12%）。6例患者具有ph-like亚型，携带KRAS（n=1）、FLT3（n=1）、PAX5（n=1）和PHF6（n=1）体细胞突变以及crlf2相关融合（n=2）和EBF1-PDGFRB融合（n=1）。整个队列的CRLF2表达水平FPKM值中位数为0.188739（范围：0-75.1）。（图1）![]()
图1 ：珠江医院队列的CRLF2表达水平和RNA分型（例数及占比）
2.CRLF2表达水平的分组
CRLF2表达量使用RNA-seq得到的FPKM进行分析。我们发现高二倍体和Ph-like亚型在队列中CRLF2过表达的B-ALL患儿中聚集。通过ROC曲线对Ph-like亚型和高二倍体亚型的预测，得出CRLF2表达量最佳截断值分别为0.2155和6.7304（图2），对应本队列CRLF2表达量FPKM值百分位数的52%和94%。以此将CRLF2过度表达分为CRLF2高表达和CRLF2中等表达。队列中有49例病人除RNA-seq外还通过RQ-PCR对CRLF2表达量进行定量（以GUS作为内参得到CRLF2 ratio)，结合之前得到的CRLF2 FPKM的分类标准，使用37.75%作为截断值能够得到区分CRLF2高表达的最佳分类效果。![]()
图2：CRLF2表达水平与Ph-like亚型及高二倍体亚型关系的ROC曲线
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图3：CRLF2-低、CRLF2-中、CRLF2-高三组患儿患儿的RNA分型
3.研究队列CRLF2表达水平分组临床特征
分析CRLF2-低，CRLF2-中，CRLF2-高三组患者的临床特点：（1）初诊合并睾丸浸润、中枢神经系统白血病、颅内出血、肝脾肿大情况及初诊骨髓幼稚细胞比例三组间无统计学差异。（2）CRLF2-高组患者的白细胞计数显著高于CRLF2-低和CRLF2-中组患者（图4）。（3）采用流式细胞仪动态监测患者在不同治疗时间点的MRD状态，监测时间点设为诱导治疗开始后第15天、第33天及巩固治疗开始前。CRLF2-中组患者在诱导治疗期间，流式MRD迅速下降，到巩固治疗前评估时MRD持续为阴性，而CRLF2-高和CRLF2-低组患者MRD残留程度不同，且存在显著性差异。![]()
图4：CRLF2-低、CRLF2-中、CRLF2-高三组患儿的初诊外周血白细胞计数水平
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图5：CRLF2-低、CRLF2-中、CRLF2-高三组患儿的流式MRD下降趋势
4.CRLF2表达水平分组对验证队列的预后预测
TARGET队列作为本研究的外部验证队列。TARGET队列包括144名B-ALL，中位年龄7岁（2-30岁），该队列的CRLF2-FPKM值来自RNA测序。将珠江医院队列获得的CRLF2表达水平的分层截断值用于对TARGET队列中CRLF2-FPKM数据进行分层，然后进行生存分析。由于珠江医院队列均为≤15岁的儿童患者，而TARGET队列患者的年龄范围为2-30岁，因此在多因素Cox回归分析中，将年龄作为分层因素。结果在验证队列整体队列及其儿童队列中，均发现CRLF2-高与较低的总体生存率（OS）和无事件生存率（EFS）相关，而CRLF2-中等与较高EFS和OS相关（图6及7）。![]()
图6：TARGET队列中年龄及CRLF2表达水平对EFS（A）和OS（B）的影响的森林图
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图7：TARGET队列中不同CRLF2表达水平亚组的生存曲线（图C、D为完整TARGET队列，含儿童及青少年，图E、F为其中儿童部分）
本研究结论：
CRLF2表达升高的患者在亚型上存在异质性。超二倍体和Ph-like亚型的患者均存在CRLF2表达升高的情况，值得注意的是超二倍体患者的CLRF2表达升高呈现为中等程度，而Ph-like患者的CRLF2表达通常很高。在TARGET队列中，我们验证了不同CRLF2表达水平对长期预后的影响。CLRF2表达升高并不一定导致预后不良，CRLF2-高组的患者预后较差，而CRLF2-中组的患者预后较好。原文链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36041707/
南方医科大学珠江医院小儿血液科主治医师
南方医科大学第二临床医学院硕士研究生
中国医药教育协会儿童用药评价分会第一届委会委员
共同第一作者：杨可言 北京高博博仁医院
南方医科大学珠江医院小儿血液科造血干细胞移植亚专科主任
