本文对之前的分享有所删改，并增添了一些内容补充，本文较长，建议收藏相互印证，过柱子相关的大部分问题将在这里终结。以下为正文部分：之前和师妹聊天，师妹传了一个合成群内的聊天记录，看到一个很有意思的问答，瞬间给笑惨了！正好值研究生开学，有好几个同学私信菜籽，让出一期关于过柱子的方法技巧的分享。总结了许久，从历史讲下来，废话比较多![]()
，三易其稿，不能说多好，大概就全流程走一遍吧，供大家参考。大家有补充的也可以后台私信分享，如果有必要，我们可以引用再做一期经验分享。菜籽已经在化学行业摸爬滚打十四五年了，之前在药厂的时候一直觉得拿到一个化合物直接过柱子是一个很low的操作。
因为菜籽是工厂技术出身，所以拿到化合物的第一个想法就是能不能用结晶，打浆，减压蒸馏，酸碱洗等方法来纯化，如果不能的话还会考虑能不能转化上个保护基啥的，在其他步骤去纯化。
直到后来进到高校，做起来了毫克级别的反应，才发现是菜籽狭隘了，上述方法真的不适用，过柱子真的的很香。而且目前在菜籽实验室来讲，过柱子的手段太多了，除了人力，还有过柱机，有循环制备型GPC，有高效液相制备，量少了偷个懒是完全可以的。![]()
当然，像菜籽这样“特权的”人并不多，“普通人”想要用，是要求他们把传统柱子过好才可以预约的。
我们常说过柱子其实就是柱层析分离，也叫柱色谱，1903年由俄国科学家首次发明使用，其把植物色素的溶液经过粉碎的碳酸钙粉末，发现从上到下在碳酸钙粉末上有不同的色带，通过对不同色带的分开提取，得到了较纯叶绿素，叶黄素等。
该方法经过经过百年的发展至今已经比较成熟，固定相也从单一的碳酸钙粉末发展到了氧化铝（又分为酸性、中性、碱性），硅胶，活性炭等，其中各大实验室最常用的便是硅胶，一般分为正相硅胶和反相硅胶！
固定相（硅胶）一般要经过纯化和活性处理，颗粒大小应当均匀统一，理论上其颗粒越小、同单位质量表面积越大，吸附能力就越高，分离效果也就越好。但是实际使用中固定相的颗粒太小时往往会存在两个情况：
过柱手段这块，除了前面说的正向循环制备，高效液相制备，过柱机这些自动分析的设备，手动过柱方面主要分为常压过柱，减压过柱，加压过柱三种。其中：
前面的内容算一些介绍，下面将以正相柱层析为例子，我们讲一下常规的上样、过柱流程：1，准备工作要做好
选取柱子时，观察有无砂板，没有砂板的柱子记得底部填一些棉花，棉花不宜太厚也不宜太薄，能挡住硅胶不下来就好。这里面涉及到一个比较争议的问题，即甲醇过柱子会不会溶解硅胶?
菜籽个人的经验是不会，一个解释见：是谁在鼓吹用甲醇过柱子会溶解硅胶？
配套的准备好最小极性的的洗脱剂，紫外灯（实验室个人推荐手提式，随时可以照一照），加压设备，以及试管架！2.选取合适的柱子，加入硅胶，浸润硅胶，拍平
柱子的选取非常重要，大小应该根据产物的量来计算，一般可以分为：几毫克的柱子（全合成最终的选择）；
几十毫克的柱子（方法学扩底物）；
500毫克到1克的柱子（方法学做原料）；
5~100g左右的柱子，
实验室最常见柱子直径和高度比值一般在1:2.5到1:15之间，上样时硅胶量是样品量的20～40倍左右。
选取柱子的标准要实际根据你样品的TLC爬板情况来，如果杂质很多挨得很近，那么尽可能选大一丢丢的柱子，使你的样品正好能铺一小薄层（建议厚度在5mm以下），如果杂质很远，这个厚度自然也可以提高，但也不建议你样品厚度超过2cm，除非这个产物就是简单冲一冲就行。
很多人会犯一个错误，就是想着我硅胶多加点，加的高高的，我样品上厚一点是不是也可以分离的很好？
这个答案是否定的！
理由是底下的样品和上面的样品不是在同一起跑线，这样只能的到一部分纯的，大部分是交叉的，过不纯不说，浪费时间浪费溶剂！
这也是为什么样品要求铺薄的原因！
选取柱子后，加入硅胶时可以通过加料漏斗，同时一定要戴上口罩在通风橱里操作，原因是硅胶吸入人体后无法代谢，会将你的肺部打成筛子。硅胶粉是最毒的粉末之一，矽肺病约占全国尘肺病的50%！
①先把装好硅胶的硅胶柱竖直放好，硅胶表面用手拍平，②硅胶柱底部连接水泵，把硅胶抽实，然后从上面倒入极性最小的洗脱剂，到洗脱剂刚要漏下时，关闭截止阀，防止溶剂抽到水泵。
③在加压状态，用最小的展开剂冲七八个柱体积就可以把硅胶浸润地均一。湿法上样，建议的做法是：用胶头吸管吸取样品，靠近硅胶最上面切面，缓慢均匀滴加样品，直到覆盖一层，然后停止加样，给点压力让油状物沉浸到硅胶层里；油状物沉浸到硅胶层里后重复这种操作多次，直至全部上完样！有些新同学可能好奇为什么这样操作，而不是一次性把湿法上样的油状物一次性上完呢？答案是这种操作可以减少样品层的有效高度。即使还没有加洗脱剂，但当油状物浸入硅胶的那一刻，柱层析就已经开始，后面的样品相当于溶剂在推动前面的样品在硅胶里吸附、解吸附。至于干法上样，除非万不得已菜籽是不推荐的，固体样品更推荐打浆或者结晶：①拌样的过程中因为要升温旋蒸，增加了样品和硅胶之间反应的可能性；②干法上样就意味着样品层里会引入吸附剂，增加了样品层高度或柱子的尺寸，需要更多的时间，更多的溶剂。
如果不得已选择了，拌产物的硅胶用量一般以1~2倍样品量为宜。其上样直接把吸附好的粉慢慢倒进柱子就好，一些要求和湿法类似。4、加入无水硫酸钠或石英砂
为了避免在加洗脱剂时撞击到样品层，使其不均匀，变形，影响分离效率，一般会在样品层上面铺一层无水硫酸钠或者石英砂。
也有见到加棉花的，但是掏出来就有点费劲了。
菜籽个人喜欢铺无水硫酸钠，因为它还有干燥的功能，对于二氯甲烷这种易挥发吸热产生冷凝水的溶剂比较友好！
在上样之后，菜籽个人喜欢先用小极性溶剂（基本不会让产物下去的溶剂）冲柱2-3个柱体积，确保上下均一，然后选比例洗脱。
“洗脱剂的比例是你产物TLC爬板爬到Rf值约0.2时的比例。”
这是菜籽看到很多书中以及很多博主分享的过柱经验，实际过程中也大差不差，个人来讲更喜欢缩小一倍梯度洗脱。
比如如果TLC爬板展开溶剂是PE/EA=2:1，菜籽更可能从PE/EA=4:1开始梯度洗脱，洗脱到PE/EA=2:1结束，一般效果更好。还有收集洗脱液的时候也是有技巧的，可以先选大一点的试管接收，TLC快到目标点了就换成小一点的试管，这样可以减少多接一点的可能性，不易包杂。如果遇到杂质点和产物点挨得比较近的情况，特别是那些荧光又比较弱的，记得不要加压，应选常压过柱，每次接半管或更少就换管，也可以提高纯化几率。很多新人有个习惯,过柱到了后期，TLC后面一两管没有产物，就默认柱子过完了，压干处理掉。等到一计算收率才发现收率偏低，或者去打谱发现谱图不正确，抓错点了，后悔莫及。所以菜籽建议您过完想要的点后柱子不要急忙处理，打核磁做收率都匹配之后再处理。如果忙，或者急着用这根柱子纯化其他化合物，建议换大极性良性混合溶剂冲一下，把这部分洗脱液单独留下来等鉴定结果。实际上，个人过柱的那些年，在看似出完产物的时候，都会换大极性溶剂冲一冲。遇到过有些东西一开始不了解形状，实际溶解性很差在柱子上断断续续出来，如用纯EA确定冲不出来了，但一旦换成二氯甲烷：甲醇体系，还会有！展开剂是指你TLC爬板时的溶剂比例，洗脱剂是指你过柱时用的溶剂，理论上洗脱剂的极性不应大于展开剂的极性。但某些特殊不好溶解的产物，过柱后期洗脱剂的极性可能会大些，常用洗脱剂极性以下面顺序递增：己烷和石油醚<环己烷<甲苯<二氯甲烷<乙酸乙酯<丙酮<<甲醇<水<乙酸对于没有砂板的柱子，填棉花有一个小技巧：可以直接拆一个衣架，用其将棉花投进入旋塞上面的出液口![]()
取棉花也有小技巧，在水龙头上接个软管，用水压可以轻易冲出来。过柱之前一定要留柱前样，特别是比较杂的体系；同时我也建议你过柱前TLC分析时点浓一点，有些杂质太稀的体系看不到！
4、油状物选择干法上样！？
菜籽看到很多硕士研究生这样操作，也看到过一些博士研究生这样操作，当时是懵逼状态，很不理解。
这得要多少的硅胶才能全部吸附住，本来固体只要1~2倍硅胶吸附，你这样操作最起码要十倍以上，也意味着相同柱子，柱效降低10倍以上，甚至远远不止！
如果你告诉我是因为产品固不固，液不液才这样选择，我会告诉你选方法重结晶试试！5、用了一次的硅胶可以用大极性溶剂（如甲醇）冲柱处理一下再用吗？不建议再使用，塔板数会降低，柱效差，分离效果也差。举个最简单易懂的例子，擦完屁屁的卫生纸，再用你都会叠成两层，而且两层的情况下都有可能一个是有些溶剂（如二氯甲烷、石油醚） 和硅胶混合的时候会明显放热，这也是为什么开始阶段有时候试管会发烫的原因，对温度敏感的化合物要小心；另一个是甲醇会溶解不纯硅胶里的无机盐，不太建议用纯甲醇这种太大极性过柱子！洗脱剂一般要根据展开剂比例选，但有时候PE/EA体系TLC不好时，可以用PE/DCM 体系试一试，说不定有更好的效果！柱子下面的活塞记得一定不要涂硅脂之类的润滑剂，相似相溶原理，会被淋洗剂带到产品中从而导致杂峰；如果担心漏液，建议采用四氟节门的旋塞。重要的事情说三遍。如果没有旋成粉状，成疙瘩颗粒就上样了，运气好可能是过不纯；运气不好可能就如同上图一样产物在柱子前头析出来，如果产品溶解性好也就罢了；如果溶解性特别不好，会导致整个柱子每个地方都有产品，即使用甲醇也一直冲不下来，到时候该怎么办？硅胶对化合物的吸附性与化合物结构、官能团息息相关 ，一般含有极性较大的基团的化合物与硅胶吸附也越大，下面是根据个人经验总结的大概排序，可以参考一下：碱和酸>醇、胺、酰胺、硫醇、酚类>酯、醛、酮>硝基化合物＞芳香族化合物>卤代物、醚>烯>饱和烃 不要勉强也不要犹豫，最正确的做法是：直接换大极性溶剂直接冲下来，重新过柱，以节省时间。无论正相柱还是反相柱，柱子内有气泡肯定会影响分离效率的。具体处理方法;如果过一些极性比较大的化合物如盐酸盐、碱性盐以及含有很多大极性基团的化合物，正相柱就不合适了，此时用到反向柱。反相硅胶具体就不科普了，但过反相柱有几点需要科普：
①有反向硅胶自然就有反相硅胶板，一般为铝板，两者价格都比较贵，所以要节省使用。
②反向柱体系可以类比HPLC，一般用甲醇-水体系，或乙腈-水体系过柱。过柱极性和正相柱相反，此体系中，甲醇大于水。
③反相柱不适用于全水体系，过完后反相硅胶要用甲醇冲洗干净，不要压干，用甲醇浸没保存
④反相柱也可以干法过柱，但拌样的的硅胶损坏比较厉害，内部空隙太大有缺陷，建议不要再回收。
两个作用，一个是抑制拖尾；一个是防止分解，特别是碱性化合物如亚胺，由于硅胶是酸性的，一定要小心。我们都知道用硅胶作固定相过柱子的原理其实是吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出，可能导致的后果就是，两个产物点，极性大的却更容易出来。这种情况在有机合成中是经常遇到的。小编也遇到过多次，此时用氧化铝做固定相可以完美解决！有些固体过柱后在溶液里TLC时点板是纯的，但是旋干点浓一点就会显现出杂质，相比较再过柱一遍，我更建议你打个浆，溶剂比例选择比洗脱剂极性小一点。
低级的酰氯肯定不适合，一定会分解；但是高级的固体酰氯还是比较稳定的，可以过柱子，但是我还是建议不要轻易接触水，毕竟水滴石穿！一般不建议过夜，一方面硅胶是酸性的，可能会导致产物变坏，另一方面，溶剂在硅胶里面是非静止的的，在截止阀关闭后，无序运动会增大，可能导致产物的平面变得凌乱。19、柱子一定不要干了！
柱子干了这事比较可怕，柱子干了意味着硅胶里混进了很多气泡用来填充溶剂缺失的体积，直接导致塔板数降低，分离度降低！
听说给本文点赞，在看，喜欢的同仁们都要发nature，science了！！！
