Daniel E. Snyder1*, Scott Wiseman2 and Julian E. Liebenberg3
礼蓝（上海）动物保健有限公司
摘要：
【背景】本研究评估了乐替拉纳(Credelio™，Elanco) 口服药对自然感染的全身性蠕形螨病犬的疗效。
【方法】在本研究中，10只临床表现为全身蠕形螨病且皮肤刮片确诊蠕形螨阳性的犬被分配到单一组，在第0、28和56天口服乐替拉纳(最小剂量为20 mg/kg)。
【结果】在接受乐替拉纳治疗的犬中，在首次和第二次给药后的56天，在五个不同部位进行皮肤刮片检查，比治疗前的螨虫计数减少了超过99.9%（P < 0.0001）。在治疗后的第56天到第84天（包括）期间，没有检测到任何活的螨虫，每只犬的蠕形螨疗效达到100%。从第28天开始（第一次评估）到第84天（研究结束），10只犬中有9只完全未检出蠕形螨，只有1只犬在治疗后的第56天发现有活的螨虫。所有接受乐替拉纳治疗的犬的蠕形螨感染临床症状明显改善，没有与药物相关的不良事件。从治疗开始6周后，所有犬的毛发再生情况明显得到改善。
【结论】本研究表明，以最低口服剂量20mg/kg 给予乐替拉纳可以显著减少和消除自然感染蠕形螨犬的活的螨虫数量。
【关键词】蠕形螨，蠕形螨病，犬，乐替拉纳，口服
背景
犬蠕形螨病是一种寄生虫性皮肤疾病，其特点是毛囊皮脂腺中蠕形螨虫体数量异常增多[1]。涉及三种蠕形螨，其中犬蠕形螨（Demodex canis）是最常见的[2]。根据病灶范围的大小，犬蠕形螨病被分为局部性或全身性。局部性蠕形螨病是一种良性疾病，大多数病例在6到8周内自行缓解[1]。当观察到五个或更多局灶性病变区域，两只或更多脚部出现蠕形螨病或涉及到整个身体区域时，被视为全身性蠕形螨病。蠕形螨病还可以根据年幼（18个月以下的犬）、成年发病（通常是四岁以上且无先前疾病史的犬）或慢性全身性（至少持续6个月的疾病状态）进行分类[2, 3]。
慢性全身性蠕形螨病是一种令人沮丧和难以治愈的皮肤病[4,5]。对于这些长期患有慢性全身性蠕形螨病的犬，如果不治疗疾病不太可能痊愈。目前可用的治疗方案包括每日、每周、每两周或每月治疗，治疗周期持续3个月或更长时间[1,5,6]。
乐替拉纳 (Credelio™，Elanco)是一种新型异噁唑啉类药物，经口服后表现出对蜱虫和跳蚤持续一个月的强效活性[7,8]。本研究旨在评估乐替拉纳在20 mg/kg的最低剂量下对犬自然感染的蠕形螨病的有效性和安全性，该剂量被建议每月一次用于治疗和控制跳蚤和蜱虫。
方法
本研究在南非共和国按照《药物临床试验质量管理规范》[9]和当地动物福利指南[10]的要求进行。研究方案由ClinVet和Elanco机构动物护理和使用委员会审查和批准。
动物和饲养管理
在整个研究过程中，犬被单独安置在严格隔离的笼子里。犬之间不可能有身体上的接触，但犬有与同类动物有视觉和听觉接触，居住条件符合公认的动物福利准则。每只犬通过植入的字母数字微芯片单独识别。本研究纳入的犬至少90天未接受过体外杀虫剂治疗，除与全身蠕形螨病相关的脱毛和皮肤病变的临床体征外，在治疗时健康状况良好。在研究期间，给犬喂食适量的商业犬干粮，自由饮水。
本研究共纳入10只犬(7只雄性，3只雌性)，均为本地犬，年龄≥6月龄，体重9.59 -17.65 kg。犬的入选标准是通过皮肤刮片确诊为蠕形螨自然感染阳性。所有入组犬均表现出包括皮肤损伤在内的全身蠕形螨病的临床体征，如脱毛、红斑、粉刺、丘疹、脓疱、毛囊脂溢、鳞屑或结痂等累及整个身体区域的病变，或5个或5个以上分散区域的局部病变(每个直径为> 2.5 cm)，或蠕形螨累及双足或多足，并根据深层皮肤刮片证实存在活蠕形螨 [11,12]。此外，所有犬只在试验第0天的前1周内未接受过任何短效类固醇药物或在前4周内未接受过任何长效类固醇药物。
试验设计和方法
在治疗前7天，犬要适应研究现场的条件。出于对动物福利的考虑，本研究不设阴性对照组。第0天定义为所有10只犬接受首次治疗的那天。在纳入研究之前，主治兽医在第-7天对每只狗进行了体格检查，以确定健康和适应性，并且在整个研究期间每天至少进行一次一般健康观察。于第-2、14、28、42、56、70、84天对每只犬进行临床检查。
根据犬的体重，在第0、28和56天给药乐替拉纳1次，每只犬服用乐替拉纳之前，在给药日进行螨虫计数。随餐给药。在每个计划给药时间点(第-1、27和55天)的前一天，只向每只犬提供其每日食物配给的一半。在每个治疗日(第0、28和56天)，在每次给药乐替拉纳前30±5分钟，我们按推荐的量向每只犬提供 每日定量的湿罐头食品。在服用乐替拉纳片之前，犬至少要吃下每日配给量的1/3。
为了确保准确和完整的剂量，药片通过口服方式给药。每只犬在给药后观察几分钟，然后在给药后的间隔大约1小时观察每只狗是否有任何异常健康状况的迹象，观察时间延续至给药后4小时。
在第-2、28、42、56、70和84天，对所有犬进行蠕形螨临床体征检查(包括照相记录)和皮肤刮片/螨虫计数。进行螨虫感染的评估，在每个预定时间从每只犬的5个部位进行深层皮肤刮片，这些部位显示了严重的螨虫感染。刮取的样本转移到载玻片上，与矿物油混合，然后在40×或100×的放大倍率下用显微镜检查螨虫成虫和幼虫的数量。在进行皮肤刮片时，对每只犬的蠕形螨临床症状和病变程度进行评估，并记录在标准化表格上。对每只犬评估了以下参数，并在犬的轮廓图上（左右两侧）进行了标注：(i)毛囊脂溢、鳞屑、结痂；(ii)脱毛（1，轻度脱毛；2，明显脱毛；3，无毛）；(iii)红斑。全身蠕形螨病的临床体征以皮损占体表的百分比进行评估，然后对以下四个参数分别进行临床评分:(i)粉刺、脓疱和丘疹;(ii)毛囊脂溢、结痂和鳞屑;(3)脱毛;(iv)红斑。
螨虫计数和疗效评估
本研究的主要评估变量是在每月给药情况下，分别在第28、42、56、70和84天，与基线计数相比，螨虫计数(未成熟和成年活螨)的减少百分比。
使用Abbott公式的几何平均值计算疗效。
有效率（%）= （Mpre - Mpost ）/ Mpre × 100
其中Mpre为治疗前组内平均螨虫计数，Mpost为治疗后组内平均螨虫计数。
如果犬只在第56日或之后没有计数(因为在较早的时间点，犬只连续两次计数为0)，则在评估中使用0。
此外，次要疗效评估变量是每只犬在每个评估日从给药前螨虫计数到给药后螨虫计数的个体百分比下降，计算如下：
减少率% (个体) = (治疗前– 治疗后)/治疗前× 100
另外，另一个次要疗效评估变量是治愈率，定义如下:
治愈率(以百分比表示)=连续两次治疗后螨虫计数为零的犬的数量/治疗前有螨虫计数的犬的总数
结果
表1为皮肤刮片的活体蠕形螨的几何平均数量，以及每次评估日的百分比减少。所有犬在治疗前有严重的螨虫感染，显示出很高的几何平均计数（每只犬的均值计数为631.7只活螨）。研究期间观察到螨虫数量减少超过99%，其中在第28天、42天、70天和84天未观察到螨虫（减少100%）。与治疗前皮肤刮片中螨虫计数相比，在第28天（t(9) = 23.5, P < 0.0001）、第42天（t(9) = 33.3, P < 0.0001）和第56天（t(9) = 13.69, P < 0.0001）在统计学上是显著的减少的。由于在第70天和第84天只有一只犬接受了皮肤刮片，因此无法进行统计检验。在每个模型中，对犬的影响均为非显著。
所有接受乐替拉纳治疗的犬在第28天和整个评估期间的皮肤刮片中，螨虫数量均减少了100%，只有1只犬在第56天的皮肤刮片中记录到10只螨虫。所有犬在最后两个评估时间点(第70天和第84天)时均无螨，表明在连续三个月使用乐替拉纳治疗后，螨虫被100%清除。
表1.连续三个月口服乐替拉纳治疗的犬，皮肤刮片日的螨虫几何平均(GM)数较基线减少量
假设本研究中观察到的100%治愈率与50%的理论自发治愈率无差异，基于此，我们使用二项比例的精确检验进行统计学评估。
检验结果显示，本研究治愈率显著大于50% (P = 0.0002, 95%置信区间:69.1-100%)。
在84天的研究期间记录了犬身上红斑丘疹、结痂、毛囊脂溢或鳞屑的发生。这些结果总结于表2中。
除第28天的1只犬外，其余犬在治疗前和治疗后均未见红斑。结痂、毛囊脂溢或鳞屑的发生率由治疗前的90%(9/10)下降至治疗后8周的20%(2/10)和治疗后12周的10%(1/10)
研究期间还评估了与治疗前毛发覆盖的身体面积比例相比的毛发再生情况。从治疗后6周开始，所有犬的毛发再生都得到了显著改善。下面一系列照片展示了从研究开始到第84天，其中一只接受治疗的犬的毛发再生和皮损改善的病例(图1)。
健康观察
本研究中没有被认为与乐替拉纳治疗相关的不良事件。
讨论
本单中心研究证实了新型异噁唑啉乐替拉纳对犬蠕形螨的口服杀螨效果。最低20 mg/kg体重的单次口服给药(在第0日和第28日)可使28日和42日皮肤刮片时的螨虫计数减少100%，在第56日时，在第三剂也就是最后一剂给药前进行的皮肤刮片螨虫计数减少≥99.9%。在第70天和第84天均未观察到螨虫(减少了100%)。与基线治疗前的皮肤刮片相比，螨虫计数下降具有统计学意义(P < 0.0001)。
所有的犬在最后两个评估时间点(第70天和第84天)结束时都是无螨的，因此在连续3个月的乐替拉纳治疗后，治愈率为100%。
当首次诊断为这种皮肤病时，由于皮肤病变的广泛性和螨虫数量多，犬的全身性蠕虫病可能难以治疗。因此，现有的和以往的治疗方案通常需要长期重复应用，并且经常使用超说明书范围的高剂量大环内酯。在这些治疗方案的基础上，不良反应并不少见，在阿维菌素敏感品种的狗中，问题可能更大[15]。
出于对动物福利的考虑，本研究未设阴性对照组。因此，我们不能低估本研究中犬的自我愈合的潜力，基于该实验室模型的治疗效果可能被高估，而不能真正反映在临床田间情况下看到的疗效。然而，本研究纳入的所有犬都有严重的广泛性蠕形螨病的临床体征，这种疾病通常被认为是一种慢性疾病，因此不太可能发生自发性自愈，如果不治疗也不会缓解[3]。既往报道，青年全身型蠕形螨病的自发自愈率高达50% [12]。虽然在成年发病或慢性全身型蠕形螨病中未观察到如此高的自愈率，但我们评估了以下假设:本研究中观察到的100%治愈率与理论中50%的自发自愈率无差异。如结果部分所述，这是通过使用二项比例的精确检验进行统计评估的。检验结果表明，本研究中的治愈率显著高于50%（P = 0.0002；95%精确置信区间为69.1%到100%），表明本研究的结果不是由于自愈，而清楚地归因于乐替拉纳的治疗效果。在这项研究中，乐替拉纳以20mg/kg体重的最低推荐剂量进行给药，用于长达一个月的跳蚤和蜱虫的控制，并且在上述讨论中提供了对蠕形螨的有效控制，第二次给药（第28天）后螨虫几乎被根除（＞99.9%），并在第三次给药后达到了100%的治愈率。伴随着螨虫数量的迅速和显著减少，临床症状得到快速缓解，表明乐替拉纳有潜力成为犬的全身性蠕形螨病治疗方案的一部分，它很方便，每月口服一次。在未来的研究中，将会通过使用患全身性蠕形螨病的家养犬，进行多中心研究，以确认乐替拉纳在本研究中所呈现出的不错的结果。其他含有异噁唑啉的药品在连续月度口服治疗后，对患有全身性蠕形螨病的犬的螨虫杀灭效果表现出类似或略低于乐替拉纳的功效[16,17]。在本研究中未发现口服乐替拉纳的不良反应。
结论
我们可以得出结论，经过连续3个月以20mg/kg体重的最低剂量治疗，乐替拉纳成功地治疗了犬的全身蠕形螨病。这一点是通过基线和治疗后皮肤刮片评估日之间的显著性（P＜0.0001）差异来证明的，整个研究期间都达到了99%至100%的功效。此外，所有犬在最后两次评估时间点（第70和84天）结束时均没有螨虫，因此经过连续三个月的乐替拉纳治疗，治愈率为100%。根据从基线到第84天临床评分的测量结果，可以看到所有接受乐替拉纳治疗的犬的临床症状也得到了显著改善。
文章来源：Snyder et al. Parasites & Vectors (2017) 10:532 DOI 10.1186/s13071-017-2472-2
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