临检(一)血液样本的采集和血涂片的制备

学术   2024-11-27 12:52   黑龙江  

1. 血液组成

(1)血液是由血细胞(红细胞、白细胞、血小板)和血浆组成。离体后血液自然凝固,分离的淡黄色透明液体称为血清。

(2)血清与血浆差别:血清缺少某些凝血因子,凝血因子I(纤维蛋白原)Ⅱ(凝血酶原)V等。

(3)全血适用于临床血液学检查;

     血浆适用于血浆生理性和病理性化学成分的测定,特别是内分泌激素测定。血浆适用于血栓与止血的检查;

     血清适用于临床化学和免疫学的检查。

2 血液 的理化性质

(1)酸碱度:正常人血液pH值为7.35-7.45

(2)血浆渗透压:正常人约为290-310m0sm/(kg·H2O)

(3)正常人血量4-5L,占体重6%-8%,其中血浆占55%,血细胞占45%。女性妊娠期间血量会增加23%-25%

【记忆】45,血量4-5L,血细胞45%,孕妇增加25%,也即1/4

(4)动脉血:鲜红色;静脉血:暗红色;一氧化碳中毒或氰化物中毒者,血液呈樱红色。


3采血方法

静脉采血法:包括普通静脉采血法和真空采血法

普通静脉采血多采用位于体表的浅静脉,通常采用肘部静脉、手背静脉、内踝静脉或股静脉。小儿可采颈外静脉血液。

皮肤消毒后,应待酒精挥发后再采血。见回血后,将针头顺势探入少许,同时去掉压脉带。抽血时,不能内推,以免形成血栓。需要取下注射器针头后,把血打入容器,防止出现溶血或气泡

真空采血法,又称为负压采血法

 

2.皮肤采血法

(1)耳垂采血痛感较轻、操作方便,检查结果不够恒定

(2)世界卫生组织(WHO)推荐采集左手无名指指端内侧血液;婴幼儿可采集𧿹趾或足跟内外侧缘血液;严重烧伤者,选择皮肤完整处采血。

3)采血时第一滴血因混有组织液,应擦去。

 

皮肤采血法:易于溶血、凝血、混入组织液,而且局部皮肤揉擦、针刺深度不一、个体皮肤厚度差异等都影响检查结果。所以,皮肤采血检查结果重复性差,准确性不好。


3动脉采血法:注意压迫止血,防止血肿

4  抗凝剂的选择

1.乙二胺四乙酸(EDTA)

(1)能与血液中钙离子结合成螯合物

(2)不适用于凝血检查、血小板功能试验

 

2.草酸盐:Ca2+结合形成草酸钙,使血液失去凝血作用,阻止血液凝固。而EDTA、枸橼酸盐与Ca2+形成的是螯合剂(可溶性的)。

 

3.肝素:肝素是红细胞渗透脆性实验的理想抗凝剂,也是血气分析常用的抗凝剂。肝素抗凝时会引起白细胞聚集,瑞氏染色产生蓝色背景,不适用于全血细胞计数、细胞形态学检查。


肝素:加强抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)灭活丝氨酸蛋白酶作用,阻止凝血酶的形成,并阻止血小板聚集等作用,从而阻止血液凝固。监测肝素:APTT,监测低分子量肝素LMWH多用抗因子Xa活性

4.枸橼酸盐:与血中Ca2+结合形成螯合物,阻止血液凝固。是输血保养液的成分,适用于血沉、凝血实验

抗凝剂就属于重点必考部分

像儿童背书一样

必须一一对应

血涂片的制备

1.新载玻片常带有游离碱质,必须用1mol/LHCl浸泡24h,清水冲洗。

2.载玻片应清洁、干燥、中性、无油腻。

3手工推片时,,通常推片与载玻片保持30°-45°夹角。

4血膜占2/3

血涂片制备制备涂片时,血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快,血膜愈厚,反之则愈薄。

血细胞比容增高、血液黏度较高时,应采用小血滴、小角度、慢推,可得满意结果;

血细胞比容减低、血液较稀时,应采用大血滴、大角度、快推。



疟原虫、微丝蚴等检查可采用厚血膜涂片法。


血液细胞染色

瑞氏染料:由酸性染料伊红(E,有色部分为阴离子【记忆】伊读一,和阴性相对应)和碱性染料亚甲蓝(M,有色部分为阳离子)溶解于甲醇而成。缓冲液是磷酸盐缓冲液(pH),用来调节pH

甲醇的作用:溶解美蓝和伊红;固定细胞形态。(物理吸附+化学亲和)。

血液细胞染色

 

2 嗜酸性物质与伊红结合,染成红色,比如血红蛋白、嗜酸性颗粒

嗜碱性物质与亚甲蓝结合,染成蓝色,比如淋巴细胞,嗜碱性颗粒

嗜中性物质与伊红和亚甲蓝均可结合,染成淡紫红色,比如嗜中性物质。

pH<pI,染色偏红

 

3.pH值的影响:偏酸时,易与伊红结合,红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红;偏碱时,易与美蓝结合

4.瑞氏染色法如血涂片上有染料颗粒沉积,可滴加甲醇,然后立即用流水冲洗。瑞氏染色时,染色过深时可用流水冲洗或浸泡,也可用甲醇脱色。染色过淡可以复染,复染时应先加缓冲液,然后再加染液。

 

5.瑞氏染色法对细胞质成分、中性颗粒染色效果好,姆萨染色法对细胞核和生虫着色较好。



细胞染色的方法评价


瑞氏染色是血涂片最常用的染色法,对细胞质成分、中性颗粒染色效果好,但对细胞核和寄生虫的染色能力略差。吉姆萨染液对细胞核和寄生虫着色较好,但对细胞质成分着色能力较差。采用瑞特-吉姆萨复合染液可得到满意的效果。


瑞氏染液新配制时偏碱,须于37℃下贮存一段时间,待亚甲蓝逐渐变成天青B贮存越久,染液的染色效果越好。染液加甘油以防甲醇挥发,加塞密闭容器以防甲醇氧化成甲酸。


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