五、血液细胞染色
1 瑞氏染料:由酸性染料伊红(E,有色部分为阴离子【记忆】伊读一,和阴性相对应)和碱性染料亚甲蓝(M,有色部分为阳离子)溶解于甲醇而成。缓冲液是磷酸盐缓冲液(pH),用来调节pH。
甲醇的作用:溶解美蓝和伊红;固定细胞形态。(物理吸附+化学亲和)。
2.嗜酸性物质与伊红结合,染成红色,比如血红蛋白、嗜酸性颗粒
嗜碱性物质与亚甲蓝结合,染成蓝色,比如淋巴细胞,嗜碱性颗粒
嗜中性物质与伊红和亚甲蓝均可结合,染成淡紫红色,比如嗜中性物质。
pH<pI,染色偏红【记忆】初中学的石蕊遇酸变红,遇碱变蓝,pH<pI,酸性,遇酸变红,
pH>pI,染色偏蓝
3.pH值的影响:偏酸时,易与伊红结合,红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红;偏碱时,易与美蓝结合,
4.瑞氏染色法如血涂片上有染料颗粒沉积,可滴加甲醇,然后立即用流水冲洗。
瑞氏染色时,染色过深时可用流水冲洗或浸泡,也可用甲醇脱色。
染色过淡可以复染,复染时应先加缓冲液,然后再加染液。
5.瑞氏染色法对细胞质成分、中性颗粒染色效果好,吉姆萨染色法对细胞核和寄生虫着色较好。
细胞染色的方法评价
瑞氏染色是血涂片最常用的染色法,对细胞质成分、中性颗粒染色效果好,但对细胞核和寄生虫的染色能力略差。吉姆萨染液对细胞核和寄生虫着色较好,但对细胞质成分着色能力较差。采用瑞特-吉姆萨复合染液可得到满意的效果。
瑞氏染液新配制时偏碱,须于37℃下贮存一段时间,待亚甲蓝逐渐变成天青B。贮存越久,染液的染色效果越好。染液加甘油以防甲醇挥发,加塞密闭容器以防甲醇氧化成甲酸。【犹如老酒,越存越香】