撰文：paperplaneIN
HIV困扰人类之久的原因在于：一是变异速度之快，容易使药物失效；二是会藏匿于人体细胞中，不被药物发现消灭。
与HIV的对抗进程中，人们已经使用联合药物解决了“变异”这一难题，如果能解决藏匿的病毒库问题，那么HIV的危险系数也许会降至感冒级别，甚至更低。
今天分享一篇关于使用使用慢病毒颗粒清除HIV病毒库的“以毒攻毒”的研究报告。
一、背景
研究背景
HIV感染目前可控但不可治愈。抗逆转录病毒治疗（ART）能有效抑制病毒复制，但需要终生治疗且伴有不良药物反应和病毒持续存在的风险。病毒库的存在会使ART停止后引起病毒反弹。为了克服这一难题，本研究探索了一种基于Rev依赖性的慢病毒颗粒，通过在感染SIV的恒河猴体内使用这些颗粒来抑制病毒在停止ART后的反弹，并展示了其在体内选择性靶向病毒库的潜力。
慢病毒颗粒是基于病毒构建的，但它们经过改造，已不再具有完整病毒的特性，而是被用作安全有效的基因转移工具。
二、研究方法
研究背景
本研究使用印度起源的恒河猴（Macaca mulatta）作为实验对象。实验分为四组，每组包含两只猴子。以下是每组的处理方式：
组A：感染SIV（可以理解为感染动物的HIV）病毒，但不进行治疗。
组B：感染SIV病毒，并接受抗逆转录病毒治疗（ART）11个月，然后终止ART以允许病毒反弹。
组C：感染SIV病毒，接受ART治疗11个月后停止ART，然后注射0.5-1ml浓缩的vSIV-HSV-1-tk-RRE颗粒。ART治疗在注射后不再恢复，以允许向量扩增和SIV复制。
组D：与组C处理相同，但在向量注射后ART治疗恢复3个月，以抑制SIV的非控制扩散。ART停止后，再次通过静脉注射10mg/kg/天的剂量进行两周的GCV（更昔洛韦，是一种抗病毒药物）治疗，以诱导HSV-1-tk对SIV+细胞的杀伤。
在注射向量之前，C和D组的恒河猴还接受了cM-T807抗CD8抗体的瞬时消耗，以防止可能的携带Rev依赖性向量细胞的快速清除。实验过程中，定期采集血液、脑脊液、淋巴结和直肠活检样本，监测病毒负荷
图1. 靶向SIV储库的SIV Rev依赖性载体的开发
三、数据分析
研究背景
血浆和脑脊液中的病毒载量：
实验结果显示，在没有ART治疗的A组动物中，病毒载量保持在高水平。B组动物在ART治疗下，病毒载量显著降低，但ART停止后迅速反弹。C组动物在注射vSIV-HSV-1-tk-RRE颗粒后并停止ART，未能有效抑制病毒反弹。D组动物在注射vSIV-HSV-1-tk-RRE颗粒并恢复ART后，病毒载量显著降低，停止ART和GCV）治疗后，病毒反弹被抑制。
中和抗体量化：
使用伪病毒中和试验，测定不同时间点动物血清中对SIV（毒株：mac251.6、mac239CS.23）的中和抗体滴度 (ID50) 值。结果显示，KC50（实验猴编号）在注射Rev依赖性颗粒后，中和抗体水平显著提高，特别是在注射第二批次颗粒后，病毒载量降至不可检测水平，并维持在稳定状态。
外周血CD4 T细胞储库的定量病毒扩增检测 (QVOA)：
通过激活KC50的外周血单个核细胞 (PBMC)，并与CEMx174细胞共培养两周，定量培养上清液中的SIV RNA水平。结果显示，在所有稀释度下均未检测到细胞相关的SIV RNA，表明外周血CD4 T细胞中的病毒储库显著减少。
图2. 脑脊液病毒载量和外周血CD4 T细胞储库的定量
四、结论
研究背景
这些结果表明，基于Rev依赖性慢病毒颗粒vSIV-HSV-1-tk-RRE在感染SIV的恒河猴中能够显著抑制病毒反弹，减少病毒储库，并诱导产生有效的中和抗体，展示了其在HIV治疗中的潜在应用价值。
未来的实验计划包括增加实验样本量和多次注射以得出统计显著性结论，评估细胞介导的免疫反应，量化广泛中和抗体，并深入研究使用vSIV-TRAF6-RRE向量时观察到的严重不良反应，以更好地理解其机制和减少潜在的副作用。
五、注释
研究背景
SIV（Simian Immunodeficiency Virus）：猿猴免疫缺陷病毒，感染灵长类动物的病毒，与人类免疫缺陷病毒（HIV）密切相关，用于研究HIV的感染机制和治疗方法。
vSIV-HSV-1-tk-RRE：基于Rev依赖性构建的慢病毒颗粒，携带单纯疱疹病毒1型胸苷激酶基因（HSV-1-tk），用于选择性靶向和杀灭感染SIV的细胞。
GCV（Ganciclovir，更昔洛韦）：一种抗病毒药物，通过抑制病毒DNA聚合酶阻止病毒DNA复制，用于HSV-1-tk基因联用诱导感染细胞死亡。
KC50：实验中的一只恒河猴编号，表现出在注射Rev依赖性颗粒后，病毒载量显著降低并长期保持在不可检测水平。
SIVmac251.6：一种SIV菌株，具有中和敏感性，用于伪病毒中和试验测定动物血清中的中和抗体滴度。
QVOA（Quantitative Viral Outgrowth Assay）：定量病毒扩增检测，通过激活静息CD4 T细胞并与CEMx174细胞共培养两周，定量测量上清液中的SIV RNA水平。
nAb（Neutralizing Antibody）：中和抗体，通过伪病毒中和试验测定，用于评估抗体对病毒抑制的效果。
bnAb（Broadly Neutralizing Antibody）：广泛中和抗体，对多种病毒株具有中和作用，用于评估抗体广度。
Rev（Regulator of Virion）：是一种病毒编码的蛋白质，在病毒生命周期中起关键作用。在本研究中，Rev依赖性载体利用了这种机制，实现了只在感染病毒的细胞中选择性表达报告基因或治疗基因。
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