“检”尿微量白蛋白,“验”污染之威力

健康   2025-02-02 15:00   山东  


作者:侯亚彬  公志华
单位:山西白求恩医院检验科


尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR),可简便、精确、快速的检测人体内白蛋白经尿液排泄情况。与24小时尿蛋白定量不同,ACR留取随机尿液(晨尿最佳)即可进行检测,其在慢性肾脏病早期筛查、诊断及危险分层判断,糖尿病肾脏疾病的早期诊断,高血压及其他心血管疾病监测以及妊娠期女性肾功能监测等诸多方面具有重要价值,已被权威的国际指南(美国肾脏基金会、美国高血压学会、美国糖尿病协会)列为早期肾病、慢性肾病的诊断和分期标准[1-2]

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案例经过



某段时间,我室在每日常规运行尿肌酐(Crea-U)、尿微量白蛋白(mAlb)和尿微量总蛋白(TP-U)三个项目的双水平质控后,均出现mAlb的2水平远超出质控允许范围的现象(图1),其余项目均在控,重新运行mAlb的2水平质控后也在控。
图1 mAlb室内质控曲线

检测患者样本时也发现多个检测项目为尿微量白蛋白/尿肌酐的尿液标本,mAlb的首次测量结果均高于复查结果。

为探其原因,本室对2水平质控和一份尿液样本进行相关项目的重复性检测(各10次),发现偶数次测定时mAlb结果出现明显的升高,重复性较差(表1)

表1 2水平质控和尿液样本重复性测定结果


案例分析



1. 检查实验室温度、湿度,均维持正常状态,所使用的仪器常规进行保养,该仪器上除外mAlb的其余22个项目质控品和样本运行均正常,排除环境和仪器造成的影响。


2. 经分析发现,质控品单水平和部分样本出现上述异常情况,且再次单独运行mAlb测定均可以纠正,排除质控品和试剂本身的影响。


3. 观察mAlb干扰结果呈一定规律出现,查看仪器同时测定Crea-U、mAlb、TP-U三个测试项目和同时测定Crea-U、mAlb两个测试项目的试剂针吸取顺序(表2),发现异常mAlb的结果均出现在试剂针吸取Crea-U试剂后,考虑可能存在试剂针交叉污染,在吸取Crea-U试剂后可能对mAlb测定结果产生影响。


表2 Crea-U、mAlb、TP-U三个测试项目和Crea-U、mAlb两个测试项目的试剂针吸取顺序


本室Crea-U试剂盒检测原理为碱性苦味酸法检测,mAlb试剂盒为免疫透射比浊法检测。查阅试剂说明书及相关文献分析[3-4],Crea-U试剂R1为氢氧化钠(强碱性)、R2为苦味酸(高亲电性和氧化性),二者均可对mAlb试剂中的羊抗人白蛋白抗体的氨基酸残基、蛋白质结构等产生影响,导致蛋白质变性,产生非特异性结合,引起假阳性结果。同时微量苦味酸还可能与免疫比浊试剂中的抗体蛋白质发生非特异反应,导致反应体系吸光度增大,使结果增加。



案例处理




为验证分析结果,本室运行交叉污染实验,结果显示在Crea-U检测后mAlb检测结果有明显干扰,存在试剂针间的交叉污染(表3)。

表3 Crea-U和mAlb试剂针污染检测程序

本室所使用的仪器为贝克曼DXC 700AU全自动生化分析仪,为单一比色系统,且不区分内、外圈比色,无法通过更改仪器比色圈的方式消除干扰(图2)。

图2 DXC 700AU全自动生化分析仪构造

为进一步解决此干扰问题,本室拟增加Crea-U检测后试剂针的清洗程序,于是对不同清洗液的类型(去离子水、5%次氯酸钠、1N稀盐酸和贝克曼系统清洗液)和清洗次数进行研究。研究发现,当清洗次数为3次时,四种清洗液均无法消除干扰;当清洗次数为4次时,去离子水清洗仍无法消除干扰,5%次氯酸钠和1N稀盐酸清洗能消除部分干扰,贝克曼系统清洗液可彻底消除干扰(表4)。

表4 Crea-U检测后四种清洗液4次清洗再进行mAlb检测结果分析

最终设置Crea-U检测后,使用贝克曼系统清洗液清洗试剂针4次(图3、图4),再次进行样本重复性检测,重复性恢复正常。

图3 仪器增加贝克曼系统清洗液2瓶

图4 仪器设置Crea-U检测后清洗参数

根据仪器所记录的样本上机顺序及项目检测顺序,查询该段时间内临床报告mAlb结果为Crea-U后检测的样本进行重新测定,对于可能影响临床医师对疾病诊疗判断的报告结果进行追回并修改,同时做好临床沟通。

进一步观察设置清洗参数后一段时间mAlb的室内质控变化,未出现类似干扰情况(图5),上述异常情况解决。

图5 设置清洗参数后一段时间mAlb的室内质控变化曲线


总结




临床生化项目检测中常见的交叉污染存在多种类型:前一检测试剂中含有后一测试项目所要测定的待测物;前一检测试剂中的某些成份干扰后一测试项目待测物的检测;前一检测试剂在某波长有很高的吸光度,残留会影响后一测试项目的OD值检测等。

全自动生化分析仪进行多项目、多样本的同时检测,由于存在试剂间的化学污染,其清洗系统不可能完全消除试剂针、试剂搅拌棒及比色杯的携带污染。一般情况下,推荐选取合适的清洗液及清洗次数,或合理编排测定顺序,同时加强仪器的日常保养和维护来消除干扰。

交叉污染所涉及的问题面广,要求检测者需要严格按规范使用和维护仪器,同时细心观察、认真思考,及时发现问题,保证检验结果的分析质量。


专家点评

公志华 山西白求恩医院副主任技师


近年,《中国慢性肾脏病早期评价与管理指南》、《糖尿病肾脏病中西医结合防治专家共识(2023版)》和《中国成人慢性肾脏病及其并发症早期筛查临床路径专家建议(2023版)》等国内权威指南和共识,联合推荐测定ACR,并提出ACR是各种原因导致的早期肾病筛查和慢性肾病诊断分期的标准,且可以作为初筛项目开展,因此高质量的ACR检测报告对于临床疾病的诊疗意义重大。


全自动生化分析仪具有多项目、多样本、快速、准确检测的特点,其很容易出现试剂针的交叉污染,影响检验结果的准确性和可靠性。试剂间交叉污染存在多种可能性,在实际工作中通过室内质控数据、性能验证或室间质评结果不易发现,常表现为实际检测结果与临床诊断或表现不相符,在排除了实验室环境、仪器、试剂、质控品等原因后仍然无法解释。这对于工作人员的要求较高,不仅需要十分熟悉检验工作的各项流程,更需要熟悉各类常见疾病的背景理论知识,以发现不相符的结果。


对于已发现的试剂针交叉污染可通过增加清洗过程和次数、改变加样顺序,将可能存在交叉污染的项目设置在不同单元、不同比色圈来消除干扰,保证检验报告的高质量要求,更好地服务于临床。


【参考文献】
[1] 高翔,梅长林.《慢性肾脏病早期筛查、诊断及防治指南(2022年版)》解读[J].中国实用内科杂志,2022,42(09):735-739.
[2] 中华医学会肾脏病学分会专家组.糖尿病肾脏疾病临床诊疗中国指南[J],中华肾脏病杂志, 2021,37(3) : 255-304. 
[3] 岳志刚,黄燕,吴秀茹,等.苦味酸试剂在生化分析中的交叉污染分析[J].中国误诊学杂志,2006,(07):1293-1294.
[4] 何清.肌酐苦味酸试剂对生化项目结果的污染及防范措施[J].国际检验医学杂志,2014,35(22):3143-3144.
 

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编辑:yeah  审校:小冉

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