大多数高级别浆液性卵巢癌 (HGSOC) 起源于输卵管，但会扩散到卵巢和腹膜腔，这凸显了了解 HGSOC 部位的抗肿瘤免疫的必要性。2024年10月，匹兹堡大学的Tullia C. Bruno课题组利用空间转录组学来了解肿瘤部位、基质和细胞相互作用如何控制三级淋巴结构的活性（The activity of tertiary lymphoid structures in high grade serous ovarian cancer is governed by site, stroma, and cellular interactions）。这些研究揭示了我们如何促进这些预后的发展，以增强适应性抗肿瘤免疫。相关结果发表在Cancer cell上。1. B 细胞和三级淋巴结构与 HGSOC 中生存率的提高相关，但在肿瘤解剖部位之间存在差异为了在大型转录数据库中测试这种关联，作者使用了 TCGA 浆液性卵巢癌队列，并测量了 B 细胞富集的预后益处。与健康供体外周血 (PBL) 相比，肿瘤内 GC B 细胞和抗体分泌细胞 (ASC) 富集。利用了 12 趋化因子 (12-CK) 转录评分（TLS 形成的预测因子），12-CK 表达最高三分位数的患者与低表达者相比表现出更好的总体生存率。定量显示，与输卵管 (FT) 和 大网膜 (OM)肿瘤相比，卵巢(OV) 肿瘤中淋巴结构的数量和大小显着减少。数据证实了 B 细胞对于 TLS 形成的重要性，而在 OV TLS 中 B 细胞显着减少。 图 1. B 细胞和三级淋巴结构与 HGSOC 中生存率的提高相关，但在肿瘤解剖部位之间存在差异2.空间转录组学揭示了 HGSOC 患者中原位 TLS 衍生的转录特征预后并表明位点特异性适应性免疫从四个独立患者样本中抽取了多个 TLS确定 OV 肿瘤中定义 TLS 的主要基因。TLS-DSP 评分位于前三分位数的患者的预后更好，年轻患者评分和预后更好。这些差异基因在肿瘤的不同位点也有差异表达。GSEA结果证实，与 OV 肿瘤的 TLS 相比，来自 OM 和 FT 肿瘤的 TLS 更具免疫活性相关通路。 图 2. 空间转录组学揭示了 HGSOC 患者中原位 TLS 衍生的转录特征预后并表明位点特异性适应性免疫3. 多光谱成像揭示了 HGSOC 解剖部位之间 TLS 状态的差异多光谱免疫荧光将淋巴结构分为三种状态（淋巴聚集体、不带 GC 的 TLS 和带 GC 的 TLS），这一比较揭示了 FT 和 OM 中存在大量高活性且类似 GC 的 TLS，而 OV 肿瘤中具有 GC 的 TLS 则很少。与淋巴结构的非 GC 区域相比，AID+ B 细胞和 AID+Ki67+ B 细胞在 GC 区域显着富集。结构上比较得出，与 OV 相比，AID+/Ki67+ B 细胞的 OM 结构显着富集，FT 趋势介于两者之间，但结果不显著。这些数据表明 OV TLS 表现出活性降低且缺乏 GC，表明它们不具备促进 B 细胞适应性免疫所需的基础设施。
图 3. 多光谱成像揭示了 HGSOC 解剖部位之间 TLS 状态的差异4. 在患者匹配的 HGSOC 肿瘤中，卵巢淋巴结构频率较低且含有较少的 GC为了确保观察到的解剖部位 TLS 差异不受患者异质性或抽样偏差的影响，比较了同一患者的 OV、OM 和 FT 肿瘤。结果显示，平均淋巴结构数量从 OV (6.80) 增加到 FT (14.27) 再到 OM (34.73)。使用 TLS 活性多重染色，以按 TLS 状态对结构进行分类，发现与图 3 中的结果类似。这些数据证实了之前对解剖部位的分析， OM和FT表现出更多的淋巴结构，与OV相比，含有GC的TLS比例更高。 图 4. 在患者匹配的 HGSOC 肿瘤中，卵巢淋巴结构频率较低且含有较少的 GC5 .空间转录组学揭示 TLS 驻留免疫细胞的 TLS 状态和活性的转录谱由于形态染色的可用性有限，因此将任何具有至少 20 个细胞的淋巴结构定义为“TLS”，然后将它们分类为未成熟（20-300 个细胞核）、中间（300-500 个细胞核）或成熟（500+ 细胞核）。DEG 分析显示，与“不成熟”OV 结构相比，“成熟”OV 结构中上调包括肌动蛋白结合和基质相互作用、Toll样受体家族和表观遗传修饰。GSEA 比较了“无且未成熟”结构与“中间且成熟”结构中的 B 细胞。更发达结构中的 B 细胞上调与 MYC、氧化磷酸化、细胞凋亡、免疫球蛋白产生和染色质修饰相关的途径。基质相关基因表达差异进一步巩固了免疫和基质串扰对于TLS的重要性。
