“飞”凡探索系列讲座:细节决定成败,深入解析流式实验的关键因素

健康   2024-10-11 08:16   上海  

小师弟一直心情不好,我们来看看他是怎么了(文末有流式实验资料手册、天猫精灵及外交官双肩包等惊喜好礼等你领!)

菜鸡互啄实验大家庭


师姐A

师弟,你这几天怎么愁眉苦脸的?

别提了!导师说我的课题要做流式分析实验,但我还是一头雾水,一会儿要配色,一会要调补偿!虽然网上的教程一大堆,但不知道该从何学起?
师弟
师姐B

这流式分析可是免疫研究的标配技术,要加油学习呀!

师兄师姐,你们做了那么多次流式实验,推荐点资料哇?
师弟
师兄

流式确实有点难度,我当年开始做流式也是摸不着北。不过你别着急,流式要从熟悉仪器配置开始,多看看激光器和发射光谱。

在流式配色上,同样尽可能减少荧光染料之间的光谱重叠,避免补偿。
师姐A
师姐B

据我所知,流式还是对照最多的了。好的对照,才能保证数据准确。

其实我也有好多问题,上一篇论文做了4色,如何才能去做更多色?
师兄
师姐B

我也是,流式胞内结果审稿很严格,都需设置什么对照?另外,平时都用细胞调节补偿,但靶标表达量少怎么办?

所以有没有大佬来教教我们?最好能给个连路过的蚂蚁都看得懂的攻略……
师姐A

看来大家对于流式实验还是有很多问题的,不过别担心!为了让大家轻松上手流式细胞术,赛默飞世尔科学技术专家将于101614:00给大家带来免疫征途系列课程《细节决定成败,深入解析流式实验的关键因素》,在这里不仅会有流式基础入门知识,大师姐还会对实验中操作难点与重点进行细致地解析,以及多年经验总结的实验工具与资源分享!现在报名直播就有机会获取网红赛默飞生命科学积木、外交官双肩包、马克杯等惊喜好礼。前400名报名成功即可免费获得赛默飞上百页纸质版的《流式细胞分析实验方案》,包含流式样本制备、细胞刺激、补偿调节、表型分析等protocol,干货满满,赶快来领取吧!


直播精彩内容抢先看

流式检测中配色注意什么?


01

了解流式细胞仪的配置


02

仪器有哪些激光器和滤光片,可以激发哪些荧光染料,可以检测哪些荧光信号;不同荧光染料有各自不同的特点。


  • 抗原表达量与荧光染料亮度相匹配

  1. 提前了解蛋白靶标在样本中的表达量,同时了解荧光染料的亮度。表达量很低的靶标需要搭配亮度高的荧光素。

  • 荧光染料发射光谱重叠最小化

    1. 同一激光激发的染料光谱重叠尽可能地减小

    2. 选用不同激光激发的荧光染料,如FITC/APC

    3. 同一细胞上的抗原尽可能地减少光谱重叠

  • 注意串联染料联合使用可能的问题

    1. 串联染料的信号衰退会降低APC或PE的灵敏度,最好选用更稳定的串联染料。

    2. 避免样本暴露于光、高温或固定剂。如果样本需要固定,请选择十分稳定、有效组织串联染料的信号衰退的固定剂。

  • 使用红激光激发自发荧光高的样本

    1. 这是因为自发荧光在波长较长时迅速降低。在自发荧光很强的细胞上,建议选择红光激发和APC标记的抗体。

  • Panel中需要加入死活染料,排除非特异性结合信号


  • 还有3条减少光谱重叠的宝藏经验将在直播讲座中与你见面!大师姐将在此次直播中为各位讲解更多的珍贵经验,给你稳妥的实验方案!





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    心动福利双响炮
    01

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    02

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