鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV),2015年划分于圆环病毒科环状病毒属，不含囊膜，基因组为单股负链环状DNA，基因组全长2 298 bp或2 319 bp，有3个开放阅读框，编码3种病毒蛋白(VPl、VP2和VP3),VP1是主要的结构蛋白，是变异率最大的蛋白；与VP2共同作用诱导产生中和抗体；VP3又称为凋亡素，会诱导鸡胸腺细胞和原始造血细胞凋亡，导致严重贫血、免疫抑制等症状[1-2]，临床常引起2～4周龄雏鸡或育成鸡群发生传染性贫血综合征(CIA)。CIAV在鸡群中可水平传播和垂直传播，目前该病在规模化养殖场中感染压力较大，给养禽业造成严重的经济损失。目前尚无治疗CIAV的有效药物，临床推荐以活苗免疫预防为主，配合良好的生物安全等综合防控措施。本试验对隔离器中饲养鸡群CIAV活苗免疫后的排毒规律进行研究，可为临床CIAV的活苗免疫防控提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验对象和免疫程序
本试验所选试验鸡来自胶东某养殖集团祖代哈伯德肉种鸡场5#栋舍，该鸡舍存栏鸡数为9800只，选取30只放入隔离器中进行试验。
免疫程序：该鸡群于8周龄免疫CIAV活苗，免疫厂家为MSD，批号为02440066，免疫途径：刺种。
1.1.2 试验试剂
2×Taq PCR Master Mix购自诺唯赞，生产批号为7E321B9；病毒DNA/RNA磁珠法机器提取试剂盒购自青岛英赛特生物科技有限公司，生产批号为2022305010;Gel Stain、50×TAE缓冲液、琼脂糖购自北京全式金生物技术有限公司。
1.1.3 试验仪器
全自动核酸提取纯化仪（青岛英赛特生物科技有限公司）、普通PCR基因扩增仪和凝胶成像系统（美国伯乐公司）；SPF鸡隔离器（苏州市冯氏实验动物设备有限公司）。
1.2 试验方法
1.2.1 样品采集
在CIAV疫苗免疫后1周、10日龄、2、3、4、5、6、7周采集肛拭子，采集30份肛拭子检测CIAV病原。肛拭子采集使用一次性无菌植绒棉签在鸡只肛门内旋转3圈，蘸取分泌物后放入1.5 m L无菌离心管中，剪去多余的部分、盖紧离心管的盖子并做好标记、冷藏保存。
1.2.2 样品前处理
肛拭子样品采用“3合一”混合样品检测方法，每个含肛拭子的离心管中加入450 L PBS，浸泡1 h左右后再进行机器提取加样。
1.2.3 CIAV-PCR检测
根据任志浩发表的文献引物[2]，由上海生工生物有限公司合成，上游序列为：GCAGGGGCAAGTAATTTCAA，下游序列为：GCCACACAGCGATAGAGTGA，扩增目的片段大小为164bp;PCR反应程序：94℃3 min,94℃30 s,57℃30 s,72℃40 s,72℃10 min,35个循环。
2 结果
2.1 CIAV病原检测结果
部分肛拭子样品PCR扩增的基因片段大小为164 bp，与预期的目的片段大小一致，说明CIAV检测结果呈阳性。结果见图1所示。
2.2 CIAV疫苗免疫后各周龄肛拭子排毒阳性率
CIAV疫苗免疫后第10天肛拭子开始排毒，阳性率为50%；免疫后2周排毒率最高，肛拭子CIAV阳性率达80%；免疫后3周开始下降，至第5周、第6周排毒率下降，肛拭子CIAV阳性率分别为10%和20%；免疫后第7周不再排毒，结果见表1。
3 讨论
CIAV既可以水平传播，也可垂直传播；种鸡在产蛋期感染后几乎无临床症状，受精率和孵化率也不会受影响；但若产蛋期感染，则可垂直传播到种蛋，导致后代雏鸡感染病毒[3]。CIAV感染会引起雏鸡全身淋巴组织萎缩，尤其是骨髓造血组织和胸腺等淋巴组织，进而导致雏鸡发生免疫抑制[4]，同时会引起继发感染，导致疫苗免疫失败。目前CIAV防控主要以疫苗预防为主，通过疫苗接种使种鸡产生抗体，从而给子代提供高水平的母源抗体[5]。CIAV的疫苗主要为弱毒活疫苗，为了与野毒感染区分，需要摸清活疫苗免疫后的排毒规律。本研究结果显示：CIAV活疫苗免疫7周后不再排毒，临床规模化养殖场大群可采集肛拭子评估CIAV的野毒感染情况，免疫后超过7周采集的肛拭子样品若检出阳性，再结合现场鸡群表现，应判定为野毒感染群。
[1]李玉燕,张秀明,彭晓艳,等.鸡传染性贫血（CIA）活疫苗免疫肛拭子排毒规律
[J].家禽科学,2024,46(05):25-27.
