胖猫解读沧派好文：我们的目标：挖药王墙角，同时也是“WHAT IF-假如，让我们来搞个IL2-PD1融合蛋白吧！”系列文章的第四期。
笔者沧老师深耕临床前研发多年，这篇文章也是其 一线研究工作踩坑得来的“心法”小结，借此机会梳理总结、并给大家分享临床前研发的那些事儿！
从沧老师的一些精心撰写的文章看，胖猫敬佩他是研发行业的“老师傅”，不可多的人才！千里马不常有，这里有一匹千里马，能识得“金镶玉”的大佬欢迎联系胖猫或者沧漠老师，一起筹划如何拿捏“药王”！
引言：通过上一篇《我们的目标：挖药王的墙角！》，候选药物的基本设定和方向都已确定，此时此刻我手中握着的就是药王的种子啊！
步入正题，获得候选药物的靶点、构型后，我们要对分子进行一系列基础测准备与复杂的功能验证，从很多方面反复挑选出综合素质最适合预定目标的分子以继续推进项目。通常的流程如下：
1. 制备对应抗原
由于本品PD1抗体序列主干是现有分子，直接对其进行表达与评估即可。问题的核心是IL2序列与额外的功能段及连接方式，这里由于个人能力有限，姑且将它们交给AI CRO公司处理。
由于之前提到获得可以直接询问何博士的机会的会议就是国内某大型AI制药公司的BD邀请才得以参加，因此这里可以假装直接把这部分工作内容交给百图X科AI制药公司。据称他们可以在绕开专利的前提下，完成对IL2-PD1融合蛋白的设计，但是需要我们协助对其进行测试。
限于篇幅，跳过当初我与他们BD及技术人员交流时所获得的信息，直接假装已经获得了若干分子用于后续测试。
2. 候选分子测试
我们首先要测试的是候选分子的基础功能，这部分一般是体外为主，体内为辅。比如PD1抗体的基本功能、IL2分子的基本功能、分子的体外安全性等。
这里不多加赘述，这些是非常基本的属性在前面也提到过，并且各大公司与CRO都非常熟悉于各种测试实验，我们要做的是做好我们能做的部分，外包出我们做不来的部分。
这里需要强调的是，本篇中所有的实验除了常规的阳性、阴性、空白对照外都必须设置尽可能多的对照品！早期研究中获得足够丰富的数据有助于我们对分子的性能把握，在写申报材料的时候也会更加游刃有余。
负责审核的专家一定是我们不能糊弄的，我们对任何对分子的疑问到专家那边都可能成为专家的疑问，在申报提交后导致补充实验甚至打回申报等严重影响项目进度的事件。
在抗体分子序列确定这个步骤中，我建议各位去参考一下我之前再生元IL2分子（《PD1-IL2，这居然还有高手？》）的参考文献，无论再生元那个复杂分子的结果如何，文章中研究的严谨与工整都是让我十分敬佩的，那种严谨的科学态度是我所期望的，因为我没有那么好，所以我只能努力学。我希望大家的工作都能做到再生元文献中那么工整细致或者更棒..…..
在经过一系列的评估以后我们得到了候选分子确定的序列，此时开展分子的临床前研究。
a. 分子的CMC工艺
在确定分子以后，我们开始构建稳定细胞株用于目标分子的表达、然后开始基于工业生产对细胞培养、蛋白纯化等步骤进行优化，同时开始药物的相关质量控制的分析方法。
b. 细胞库建立与工艺放大
根据相关法律法规的要求建立生产用三级细胞库、生产工艺放大到中试规模。
c. 中试批次放大生产
中试规模下生产药物、模拟商业化应用的条件、对药物稳定性进行评估、分析药物表征、药理毒理药效研究、药代动力学研究、生产工艺优化等。
d. IND
资料整理、撰写申报材料、提交IND。相比我这个做临床前开发，各位看官大多应该在各方面了解都要深入一些，我就不在这边班门弄斧教大家细节了。
但是其中有一些感触还是可以分享的，由于药物临床前的复杂与fast-follow产品在时间进度的高度紧张，我们在临床前尽量要协调好所有部门与个人的工作安排与时间节点确定，这一定是个非常需要沟通的事情。项目管理人员一定要尽可能多的去了解各个组件工作进度与遇到的困难并迅速协调解决问题，就拿最简单的药理药效实验以及高度复杂体系化的CMC来说各举几个“磨人”的事情：
（1）药理药效-体外体内：
①肿瘤免疫对照品这里选了K药对吧，O药你要不要准备呢？
②可能存在的私下合成的IBI363、现有的IL2药物等等对照品你要准备多少才够体外体内的两组人分？
③各种试剂药物的采购周期协调，还有要不要比一下价呢？
（2）体内实验：
①普通的小鼠很好定，随叫随到，那HPD1小鼠呢？你要不要先搞几个来实验一下？实验动物的预定周期怎么排？订早了老鼠老了怎么办？
②肿瘤免疫实验你要不要去搞TIL？
③那你准备什么时候取样？TIL组和别的药效组怎么安排老鼠？
（3）CMC
①某个试剂生产中特别好用，但是贵，你要不要用？用了成本可能翻倍哦！但是特别好用，你用不用？
②CMC那边试剂你要准备多少，试剂日期怎么样会不会有过期或者备货不足的问题？
以上仅仅是一些近乎于胡诌的问题，能博各位看客笑笑便好。
IND材料我可以提的地方不多，但有一条可以讲，一般情况下一个公司不可能为了一个项目单独组建一个申报团队，因此负责写材料的和做实验的可能不是一群人，因此早研与CMC等部门有义务为IND部门提供足够的信息支持包括但不限于；各种实验的科学解释、自身项目周期安排等等，这样对大家都有好处。
好了，申报做完了，假如一切顺利不用补实验，那么我们到了临床阶段，等一期出了结果就可以开始BD啦（开玩笑）
临床实验我不懂，因此我不加妄言，一笔带过。
（1）Ⅰ期临床试验：主要进行安全性和有效性初步评估，对于抗肿瘤药物可直接在患者上进行。
（2）Ⅱ期临床试验：在患者上进行，主要进行有效性评估。
（3）Ⅲ期临床试验：在更多的患者上进行随机对照试验，进一步对有效性和安全性进行评估。达到预期指标后，可以进行新药上市申请（NDA/BLA）。
一般到二期临床一个药物就已经可以说看到曙光了，比如我的家人在参加的某HER2 ADC二期临床，目前状态良好。因此我希望各种国产创新药的临床都能顺顺利利的，病人与药物统统捷报频传。
总结：
好了，其实这段写的非常非常惆怅，因为一整个药物研发的流程显然超出了个人能理解的范围，这是个极度复杂的整体，堪比一场大型会战，因此我在这里写的非常笼统。我曾经想把1-4的各个测试实验都写出来，但个人能力有限，所谓想的越多，写的越少，写的越少，想得越多。
我仅仅是构思它们并少量尝试去测试它们都已经累得头疼，在完成上一篇后我脑壳疼了2个小时人躺了3小时才缓过来。所以还请各位看官多多包涵。本篇为WHAT-IF IL2-PD1的第四篇，以半掉书袋的方式描述的模拟抗体的研发与临床前。
下一篇将以Q&A的形式松散的表述出我在这个思考模拟流程中关于IL2-PD1的所学所得，希望各位至少能有个及格的阅读体验。
