下文预告：如果TCE双抗有两个anti-CD3的臂，会使免疫细胞互相攻击么？从亲和力的结合速率ka来探讨。
~本~文~提~要~
对于TCE双抗：
【1】为什么通过加快解离速率kd，来削弱anti-CD3亲和力？
【2】为什么不能强化anti-CD3亲和力？
【3】为什么不通过减慢结合速率ka，来削弱anti-CD3亲和力？
1.1【细胞与TCE双抗】
TCE (T cell engager)双抗被用于连接肿瘤细胞与T细胞。
↓ ↓ ↓ 下图左侧：肿瘤细胞表面，有肿瘤相关抗原(TAA)。
↓ ↓ ↓ 下图右侧：T细胞表面有CD3ɛ。
↓ ↓ ↓ 下图：双抗(BsAb)为1+1 Format，既抗TAA，又抗CD3。
↓ ↓ ↓ 下图左侧：Anti-TAA端为慢解离，即持续结合。↓ ↓ ↓ 下图右侧：Anti-CD3端为快解离，即短暂结合。
↓ ↓ ↓ 下图左侧：BsAb遇到肿瘤细胞，并牢固结合TAA。BsAb的绿色ani-CD3端，准备与CD3结合。↓ ↓ ↓ 下图右侧：BsAb遇到T细胞，并结合CD3，但由于解离迅速，每个BsAb只能短暂停留。呈现出“迎来送往”的景象。如果抓拍任一时刻快照，只能看到1个BsAb在T细胞表面。
↓ ↓ ↓ 下图：右侧T细胞，前去结合左侧肿瘤细胞。
↓ ↓ ↓ 下图：一个BsAb连接起两个细胞，这个连接是暂时的，因为红色箭头的结合，其解离速率很快，相当于倒计时。
↓ ↓ ↓ 下图：在解离倒计时之内，左侧的【TAA+BsAb】复合物，与右侧的【CD3】，如果刚好随机移动到两细胞交界面，很容易形成【TAA+BsAb+CD3】，就暂时无法逃离，此处相当于一个陷阱。
↓ ↓ ↓ 下图：在局部形成多个【TAA+BsAb+CD3】连接，才能进而形成免疫突触。然后T细胞消灭肿瘤细胞。
↓ ↓ ↓ 下图左侧：有一个其他的免疫细胞，表面表达了FcγR受体(CD16、CD32、CD64)。这个免疫细胞也处于“迎来送往”的状态，与体内各种抗体短暂结合。FcγR受体与抗体Fc之间，大都也是弱亲和力。↓ ↓ ↓ 下图右侧：T细胞表面牢固结合了很多BsAb。↓ ↓ ↓ 下图：左右两个免疫细胞相遇并结合。两侧细胞膜紧密贴合，导致两种免疫细胞表面各种免疫受体，互相结合成功的概率（即结合速率ka）大大增强，可谓是免疫受体结合的狂欢，免疫激活与免疫抑制共同迸发。引燃细胞因子风暴(CRS)，直到这时，T细胞可能都还没遇见肿瘤细胞的TAA呢。Q：那把Fc Silencing突变，比如LALA突变等方案，可以么？A：Fc沉默突变，通常无法彻底消除抗体与FcγR的亲和力，实验依然能检测到很弱的结合信号。只要连接点足够多，即结合价数足够多(Multivalent)，很弱的亲和力也能使两个细胞连接。
↓ ↓ ↓ 下图：BsAb牢固结合肿瘤细胞，BsAb也牢固结合T细胞。在BsAb浓度过量的情况下，两种细胞却无法结合，即Bell-Shape曲线的问题。
↓ ↓ ↓ 下图：在某一时刻，T细胞表面只有一个BsAb，左侧FcγR与右侧BsAb之间虽有弱结合，但会迅速解离，不会产生实质性影响。
Q：本文通过加快解离速率kd，来削弱anti-CD3亲和力。那换个思路，通过减慢结合速率ka，来削弱anti-CD3亲和力，是不是一样呢？A：↓ ↓ ↓ 下图，本文曾提及：“如果抓拍任一时刻快照，只能看到1个BsAb在T细胞表面”。需要有快速的解离速率kd，才能产生这种稳态steady state的效果。A：↓ ↓ ↓ 下图，从结合曲线上观察，把结合阶段时间延长。对于绿色的快速解离，任意浓度下，很快就会形成这种稳态steady state的效果。结合阶段其实是结合动作与解离动作同时在发生。新结合的分子与新解离的分子，刚好在binding signal上互相抵消。对于橙色的缓慢结合，只要结合阶段时间足够长，binding signal会持续上升。↓ ↓ ↓ 下图：红色是CD64，是FcγR之中一种受体。黄与绿是抗体重链，白色是抗体轻链。CD16、CD32也结合于相同位点。（ProA、ProG、FcRn与抗体Fc都是二价结合，即一个Fc Dimer能结合两个ProA。但FcγR、C1q都是单价结合）↓ ↓ ↓ 下图：假如强行让一个白色Fc，结合红与蓝两个CD64，那红与蓝之间会有空间位阻。说明：Fc只能结合一个CD64。大自然为什么要让抗体单价结合FcγR呢？假设是二价结合，那表达FcγR的免疫细胞，很容易就与路过的抗体形成二价结合，免疫细胞表面将铺满抗体。
如果只知道亲和力KD数值，而没有结合速率ka，也没有解离速率kd，其实很难猜测抗体具体性质。尤其是对于anti-CD3的设计，其亲和力很关键。Lim, KyoungSoo et al. “Clinical Pharmacology Strategies for Bispecific Antibody Development: Learnings from FDA-Approved Bispecific Antibodies in Oncology.” Clinical pharmacology and therapeutics vol. 116,2 (2024): 315-327. doi:10.1002/cpt.3308在这篇Review中，作者辛苦搜集了各个亲和力KD，其中很多KD数据极难查找。在很多其他Review中，都并未展示亲和力相关数据。
Q：小编写本文，是打算重点推荐TCE双抗么？
A:小编优先推荐双抗ADC设计。前文链接如下：
《传奇生物亲和力启示》 《传奇生物亲和力续篇》
↓双抗ADC，亲和力设计：
双抗ADC两步结合优势：TME的肿瘤细胞高表达靶点A与B，靶点A在健康器官1中也有表达，靶点B在健康器官2中也有表达。双抗只有先结合靶点A，才能再结合靶点B。两步验证后，才启动攻击。
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Q: 多位朋友问小编：这个公众号是由小编一个人写的么？
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