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作者
闫秀丽a, b, 李剑b, c, 马青青b, 王洪江d, 李霖b, c, 赵慧b, 秦成峰b, 李晓峰a, b
b 军事医学研究院，北京微生物流行病研究所病毒学研究室，病原微生物生物安全全国重点实验室，北京
c 清华大学医学院，北京
d 中国人民解放军战略支援部队特色医学中心，北京
摘要
甲型肝炎减毒活疫苗H2株是将野生型甲肝病毒H2w分离株在细胞中连续传代后获得的，其减毒机制仍不清楚。在本研究中，我们使用融合技术构建了H2株的全长感染性cDNA克隆。由cDNA克隆拯救获得的H2株（H2ic）与亲本H2株在肝癌细胞系Huh7.5.1和用于疫苗生产的2BS细胞系中均能有效复制。此外，H2ic与H2感染均未导致Ifnar1-/-C57小鼠出现肝损伤疾病。为了鉴定H2株基因组中的细胞适应性突变，以其感染性cDNA克隆为骨架，将H2w的非结构蛋白替换H2ic的相应区段后获得了系列嵌合病毒。与H2ic相比，携带H2w的3C或3D蛋白的嵌合病毒在Huh7.5.1和2BS细胞系中的复制力减弱。携带H2w的2B、2C或3A蛋白的嵌合病毒未拯救成活。此外，H2ic和嵌合病毒在小鼠中的致病性无显著差异。上述结果表明，2B、2C和3A蛋白中的适应性突变对于H2株在细胞培养中的有效复制至关重要。3C和3D蛋白的突变有助于进一步增强病毒在细胞中的复制能力，但不影响病毒在小鼠中的减毒表型。本研究构建了甲肝减毒活疫苗H2株的第一个反向遗传学系统，以此为工具发现了该减毒株适应细胞培养所必需的病毒蛋白。
Fig. 2. Growth kinetics of the parental H2 virus and the recovered H2ic.
Fig. 4. Replication of chimeric viruses containing non-structural proteins from wild-type H2w in cells.
Fig. 5. Infectivity of the chimeric viruses in mice.
Notes: The sequence of the H2 strain was aligned with those of clinical isolates including H2w, AH, and FH. The amino acid identity is represented by dots.
a Nucleotide positions correspond to numbering for H2 strain (GenBank accession number PP860039).
b The strain was isolated from the feces of patients with hepatitis A (Hu et al., 2002).
c The strains were isolated from fulminant and acute hepatitis patients (Fujiwara et al., 2001).
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