077 研究快报 | 改变瘤胃脂肪中脂肪酸的比例对育肥安格斯牛生长性能、脂质代谢、肠道屏障、盲肠微生物群和炎症的影响

文摘   2024-08-03 12:00   中国香港  


研究背景

现代营养学认为,动物对脂肪的需求实际上是对脂肪酸(FA)的需求,因此动物营养领域开始关注个体FA代谢差异对动物生产性能的独特影响。
C16:0作为常规饲料原料或动物体内脂肪中含量最丰富的饱和脂肪酸(SFA),因其高效的能量效应而被广泛用于改善动物的生产性能,尤其是奶牛的生产性能。
Cis-9 C18:1在抗炎方面有着显著作用,对哺乳期的奶牛的研究还表明,增加其补充可以改善机体能量分布从而增加体重。
然而,目前依然尚不清楚C16:0和cis-9 C18:1如何通过体内差异代谢调节育肥牛的生长和健康。
本试验旨在用cis-9 C18:1部分替代C16:0对育肥牛的生产性能的影响,以及对肠道稳态的调节和炎症通路的影响,为肉牛的精准、高效、健康FA营养提供一定的理论依据

材料与方法

依据体重相近原则,选用30头21月龄安格斯牛,均分为三个组,每组10头。各组情况如下:
CON组(对照组):不含额外脂肪;
PA:添加2.5%的棕榈酸钙盐;
MA:添加2.5%混合脂肪酸钙盐;
两种脂肪补充剂均为过瘤胃脂肪,各组脂肪添加量均为日粮干物质(DM)的2.5%,替代CON日粮中的沸石粉,其他成分相同。
在0、52和104 d时测定体重,计算得出平均日增重(ADG),记录每天的饲料量和余量以计算干物质摄入量(DMI),并且每周收集一次饲料样品,低温保存后再实验室进行养分分析(包括粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、脂肪酸(FA)等)。
在0和104 d时在晨饲前采集血液,低温离心后于-20℃保存,用于后续分析。血液样本送测以测定测定甘油三酯(TG)和胆固醇(CHOL)。
免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)、血浆中的二胺氧化酶(DAO)活性、D-乳酸、LPS和脂多糖结合蛋白(LBP)使用试剂盒测定。
在试验结束时,所有的公牛都被转移至屠宰场进行人道屠宰,将皮下脂肪、内脏脂肪解剖并称重。
取空肠组织、内脏脂肪(肠系膜)和盲肠内容物,用液氮冷冻后置-80℃冰箱,从空肠和内脏脂肪样品中提取总 RNA,用以后续q-PCR和微生物测序。
使用试剂盒提取盲肠内容物的DNA,并进行PCR扩增,扩增后测序并质控得到OUT,用于α多样性分析;计算评估微生物群的丰度,同时用于β多样性分析;使用R软件的“ggplot 1”包生成主坐标分析(PCoA)。

试验结果

生长性能与表型特征

在试验前期(0–52 d),PA 较CON 和 MA 显著提高了育肥公牛的 ADG。
这可能是因为补充脂肪后膳食能量浓度更高。
MA 相较于 PA 有降低 DMI 的趋势,但不显著,可能是由于脂肪酸组成的差异造成的。
在试验后期(52–104 d),DMI、ADG 和 FCR 不受脂肪补充的影响。
脂肪补充(包括PA和MA)对屠宰体重和背最长肌肌内脂肪含量无显著影响,但内脏脂肪重量显著增加。
与CON和MA相比,PA的血浆胆固醇(CHOL)水平显著增加。
与MA相比,PA有增加血浆TG的趋势,但不显著。
盲肠微生物

预处理去除低质量序列后,有多于70,000个序列片段,其中每个样品的有效序列中有超过八成为高质量序列,这表明测序深度足以满足后续分析的要求。
按照97%相似阈值进行OTU聚类,分别在CON、PA和MA中分别鉴定出3,659、2,796和2,592个OTU。
添加脂肪的饮食(PA和MA)降低了盲肠微生物的丰富度,MA的下降比PA更显著。
PCoA(2维)分析也显示CON、PA和MA类群形成了3个不同的聚类,且分离显著。

Firmicutes(厚壁菌门)、 Bacteroidota(拟杆菌门)和Verrucomicrobiota(疣微菌门)是3种饮食下公牛盲肠中的优势门,占比均超过95%。
2种脂肪补充处理(PA和MA)对厚壁菌门的相对丰度均没有显著影响,但通过减少拟杆菌门,厚壁菌门与拟杆菌门的比例显著增加。
PA的Proteobacteria的丰度显著增加。
属的水平上,优势属为Ruminococcaceae_UCG-005、Ruminococcaceae_UCG-010_unclassified、Rikenellaceae_RC9_gut_group、Eubacterium_coprostanoligenes_group等。

在三种饮食中鉴定了21个不同的细菌类群,其中9个细菌类群是CON特有的,6个是PA特有的,6个是MA特有的。
PA 下有 Clostridiaceae、Rikenellaceae、Rikenellaceae_RC9_gut_group、Rikenellaceae_RC9_gut_group_unclassified、Ruminococcus、Ruminococcus_unclassified。MA 下检测到了 Verrucomicrobiota、Verrucomicrobiae、Verrucobiotices、Akkermansiaceae、Akkermansia、Akkermansia_unclassified
肠道基因表达与内毒血症

内毒血症(原文中endotoxemia,即指革兰氏阴性细菌细胞壁 LPS 进入体循环)是肠道屏障改变的结果,也是饮食脂肪引起的过度肥胖,进而引发的低度炎症的主要因素。
与CON相比,PA显著下调育肥公牛空肠中zonula occludens-1(ZO-1),和Occludin基因的mRNA表达。
脂肪补充处理(PA和MA)均显著下调Claudin-1的表达,且PA的表达水平显著低于MA。
两种脂肪补充处理(PA和MA)均显著增加肠道通透性标志物血浆DAO含量,且MA显著低于PA;而另一种标志物D-乳酸不受影响。
两种脂肪补充处理(PA和MA)均显著增加血浆LPS含量,PA显著增加血浆LBP含量。
血浆炎症因子及免疫球蛋白

与CON和MA相比,PA显著提高了育肥公牛血浆中TNF-α的含量。
两种脂肪补充日粮(PA和MA)均使血浆IL-6浓度显著高于CON,但MA的增幅显著低于PA。
与CON和MA相比,PA显著降低了血浆中IgG的含量,对IgA和IgM均无显著影响。
脂肪组织及炎症反应基因表达

与CON相比,两种脂肪补充处理(PA和MA)均显著上调内脏脂肪组织中Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)的表达,且MA的NF-κB表达低于PA。
在各处理组中,仅PA显著上调了TNF-α和IL-6的表达。
各处理组对内脏脂肪组织中IL-1β、IL-10、过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达均无显著影响。
皮下脂肪及背最长肌的脂肪酸组成

两种脂肪补充处理(PA和MA)均显著增加了C16:0、C17:0和总脂肪酸(ΣFA)的含量,并且有增加cis-9 C18:1的趋势。
与CON和MA相比,PA显著增加了C18:0和总饱和脂肪酸(ΣSFA)的含量,但显著降低了C21:0的含量。
与CON相比,PA显著降低了皮下脂肪中单不饱和脂肪酸(MUFA)与SFA的比率(MUFA/SFA)和不饱和脂肪酸与SFA的比率(UFA/SFA)。
与CON相比,PA显著增加了C14:0、C18:3 n-3和总n-3脂肪酸(Σn-3 FA)的含量,而MA则显著降低。
两种脂肪补充日粮(PA和MA)均显著增加了C16:0和C18:0的含量,同时显著降低了C16:1的含量。
而另一种重点关注的脂肪酸cis-9 C18:1在三种处理下均没有表现出显著差异。
与MA相比,PA显著降低了总多不饱和脂肪酸(ΣPUFA)的含量。
与CON和MA相比,PA显著增加cis-9 C20:1、ΣSFA和ΣFA含量,而显著降低C18:2 n-6、总UFA(ΣUFA)、总MUFA(ΣMUFA)、总n-6 FA(Σn-6 FA)、MUFA/SFA、UFA/SFA的含量。
MA 的皮下脂肪中cis-9 C18:1 高于 CON,这可能是由C16:0 脂肪酸的延长和去饱和所致。
结论
在本试验条件下,高 C16:0 脂肪补充剂提高了育肥公牛 0–52 天期间的生长性能。
用30 %的cis -9 C18:1替代 C16:0可通过加速脂肪酸的氧化利用、改善抗炎细菌 Akkermansia 的定植、减少肠道屏障损伤和下调NF-κB活化来降低皮下脂肪肥胖、脂肪组织和全身低度炎症的风险。
最后:
本试验依然存在一些局限性。
cis -9 C18:1的存在并没有提高牛肉中的cis -9 C18:1,也在一定程度上降低了 C16:0 的育肥效果。
未来仍需要进一步研究以确定 C16:0 和cis -9 C18:1的最佳比例,以有效增重并维持育肥牛的身体健康。

了解更多请阅读原文献:

https://doi.org/10.1186/s40104-024-01052-1
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