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富血小板血浆的制备与治疗肌肉骨骼系统疾病的研究进展
（一）
近年来，使用生物制剂来治疗和加速康复肌肉骨骼系统疾病的方法越来越受到人们的关注，如早期的轻度至中度骨关节炎、软组织损伤以及软骨损伤等，从基础研究和动物模型开始，最后引入临床。生物制剂是天然存在于人体内的物质，在改善软骨、修复受伤的肌肉及肌腱、促进骨折的愈合等方面发挥重要作用，包括富血小板血浆（PRP）、富血小板纤维蛋白（PRF）、浓缩生长因子纤维蛋白（CGF）等物质。其中，富血小板的血浆（PRP）是一种血液来源的制剂，在治疗肌肉骨骼疾病方面的应用有着突飞猛进的发展。虽然PRP的生物学临床效应已经得到一定的研究，但其制备的方法以及对肌肉骨骼疾病的治疗上还需进一步探讨。到目前为止，富血小板血浆的制备方法比较多，不同制备方式下所获得的制剂成分也不相同，这就使各种制备方法的比较具有挑战性。随着越来越多的人开始将这些生物制剂用于临床治疗，能够证明其通过不同制备方法所获得的生物制剂是否有效，还缺乏大量的有力证据。就目前来说，对于PRP的制备还缺乏一个明确的指导原则和标准。本篇综述的目的是探讨PRP的制备方法及治疗肌肉骨骼疾病的一些相关研究进展。
富血小板血浆的制备
PRP的主要制备方法为传统手工制备法（离心法）和全自动制备法（血浆分离置换法）。离心法是依据血液成分中各因子沉降系数的差异，通过离心的方式来获得富血小板血浆，按照离心次数的差别，可以把PRP的制备方法分为：一次离心法、两次离心法及三次离心法。然而，不同的离心方法所获得的富血小板血浆，各因子含量也不相同。其中，二次离心法为最普遍、最常用的制备方法，其获得富血小板血浆的质量最好。而全自动制备法则是利用专业仪器把全血通过离心的方式转变成富血小板血浆等医用成分血。
传统手工制备法 Anitua制备法：在室温下将获得的血液在160g下离心6min，使血液分成3层，上层是缺乏生长因子的血浆（PPGF），中层为富含生长因子的血浆（PRGF），即为PRP层，下层则是红细胞。去掉上层，收集中层及下层的上部1~2mm，轻摇即可得到PRP，此法为1次离心法，此方法介绍了应用富含自体来源生长因子的血浆所产生有益作用的初步临床证据，是早期制备PRP的方式之一。Landersberg制备法：此法将静脉血先在100g或200g下离心2~20min后，将所得血浆再以100g、200g、250g或400g离心2~10min。制剂的上半部分为贫血小板血浆，下半部分为富血小板血浆，此法为2次离心法。Aghaloo制备法：将血液在215g下离心10min后，将含有血小板的血浆与红细胞分离，把血浆从顶部抽出，再在863g下离心10min，分离血小板，即可获得富血小板血浆，此法为2次离心法。Petrungaro制备法：首先将血液在1500g下离心6min后，把上清液至交界面下3mm的部分转移到新的离心管之中，再以1000g离心力离心6min。离心之后把离心管中约3/4上清液吸取丢弃，再将离心管中剩余部分摇晃均匀，即可获得富血小板血浆，此法为2次离心法。Sonnleitner制备法：先把血液在160g离心力下离心20min，吸取离心管中血细胞成分（BCC）和血清成分（SEC），将其转入到另一支离心管中，再以400g离心力离心15min，将交界面以上的成分遗弃，把剩余部分进行充分混合，既可获得富血小板血浆，此法为2次离心法。
全自动制备法 全自动制备法是依靠专业操作人员将血液通过专业仪器进行离心分离获得富血小板血浆的一种方法。尽管这种方法更先进、更准确，但是其价格昂贵、不易保存，并且其操作需专业人员完成，要求较高，所以尚未在临床上推广。根据所制备产品的药理学及物质特征的不同，其采用的制备方法也不相同，如：Curasan、SmartPReP、PCCS、GPS等。
Curasan试剂盒法：先把血液以转速为2400rpm在离心机中离心10min后，使用空气套管将含有血小板的黄色血浆收集到具有长套管的中性采血管中。再以转速为3600rpm离心15min。通过长套管和空气套管抽吸入第二个中性采血管中。使用常规振荡器将血小板沉淀物重新悬浮于血浆中，即为富血小板血浆，此法为2次离心法，这种方法获得的PRP浓缩物由大量血小板、白细胞和纤维蛋白原组成，但也含有残留红细胞。
SmartPReP制备套装：此制备套装所使用的离心机由两个相互连接的隔室组成，并具有特定的离心和收集装置，制备PRP的过程是由制造商提供并编程的离心机进行制作。加入血液后，根据其重量和离心速度的变化自动将上层（贫血小板血浆和血沉棕黄层）由第一室转移到第二室中再次离心，此法为2次离心法，两步离心过程在12min内完成，操作简便快捷。
PCCS试剂盒法（血小板浓缩物收集系统）：将血液在离心机中以3000rpm转速离心3.75min，把含有血小板的血浆转移至收集袋中，再以3000rpm转速进行第二次离心13min，最后通过按压收集袋，使血小板重新悬浮于残余血浆中，即为富血小板血浆，此法为2次离心法，并且有研究表明此方法可获取较高数量的血小板，其收集效率也较高，但此系统为半封闭系统，是否能够降低细菌污染风险暂且未知。
GPS制备法（重力血小板分离系统）：此法是将血液注入GPS一次性装置中，并使用台式离心机在3200rpm转速下离心12min。离心后，将血液样品分离成不同的部分，把其中的贫血小板血浆去除，然后进行第二次离心，离心之后将该管剧烈振荡30s，使血小板悬浮在剩余的血浆中，即可得到富血小板血浆，此法是2次离心法，是商业上可用的一种分离方法。
来源
中国矫形外科杂志2019年8月第27卷第15期
未完待续
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