小吉小吉，请问下我按照您之前推荐的路线繁育，前期出生的子代鉴定都很顺利，但繁育了多代之后，突然子代flox和wt条带都鉴定不出来了，这是为什么啊？
是的是的，我也遇到过类似的情况，而且有一些小鼠，即使不携带Cre，也会出现敲除后的表型，请问下这是怎么回事啊？
两位同学别着急，这种情况通常是Cre在生殖系统的表达，导致生殖细胞中flox在cre的作用下被敲除，所以由此形成的胚胎及发育成的个体中flox发生广泛敲除，表现为全身KO的基因型。下图就是精原细胞-精子发生过程中，精子发生敲除的其中一种案例。
我的Cre靶标组织并不是生殖细胞，也会发生类似的情况吗？
是的，很多Cre模型虽然靶标组织并不是生殖系统，但这些启动子在生殖细胞可能存在较低的活性，引起少量子代小鼠发生泄漏敲除。这种敲除可遗传，如果没有及时发现，可能会导致KO等位基因在繁育过程中不断累积，也就会出现之前提到的，繁育代数多了以后才出现基因型鉴定结果或表型不符合预期。
非常感谢您的解答，那请问我们该如何筛选并淘汰这样的小鼠呢？
我们可以通过非Cre靶标组织的DNA基因型鉴定来进行分析，如下图所示，通过F1/R2的引物组合进行PCR扩增，就可以判断待检样品中是否存在敲除后截短的null条带。比如cre靶标组织是肝脏，我们可以通过鼠尾DNA的PCR来检测该cre在鼠尾中的泄漏情况。
需要注意的是，一些血细胞、肌肉、结缔组织相关的Cre不适合此类检测方案。因为PCR非常灵敏，只要有很少量的敲除，就能检测到截短的PCR产物。
非常感谢老师的答疑，我们会尽快补充PCR鉴定，并根据验证结果优化小鼠繁育方案。
江苏集萃药康生物科技股份有限公司（GemPharmatech Co., Ltd，股票代码：688046）创立于2017年，是一家专业从事实验动物小鼠模型的研发、生产、销售及相关技术服务的高新技术企业，系亚洲小鼠突变和资源联盟企业成员以及科技部认定的国家遗传工程小鼠资源库共建单位。
公司基于实验动物创制策略与基因工程遗传修饰技术，为客户提供具有自主知识产权的商品化小鼠模型，同时开展模型定制、定制繁育、功能药效分析等一站式服务，满足客户在基因功能认知、疾病机理解析、药物靶点发现、药效筛选验证等基础研究和新药开发领域的实验动物小鼠模型相关需求。
