其中一条就引起了CMC人的广泛关注，该指南将细胞复苏仪纳入细胞药物生产体系中，并且明确指出细胞复苏仪宜采用无水加热方式，如使用水加热方式应采取对水的隔离措施。这不仅监管方对于细胞治疗质量控制的一个重要举措，更意味着无水复苏仪代替水浴锅的时代已经来临！
下面小编就和大家一起回顾一些传统细胞复苏的“各种大坑”，有助于大家理解为社么需要无水复苏仪。
细胞复苏的基本原则
快速融化：细胞复苏过程升温要快，防止在解冻过程中水分进入细胞，形成冰晶，影响细胞存活。
在复苏时，需要快速升温，在 1-2 min 内融化并稀释，这时细胞内外还来不及形成较大的冰晶，也不会使细胞长时间暴露在高浓度的电解质溶液中，从而避免细胞损伤，提高细胞存活率。
避免温度变化：在复苏过程中，应尽量避免温度的剧烈变化，以免对细胞造成额外的压力。
细胞复苏的实验步骤及注意事项
（1）提前从液氮罐中取出需要解冻的冻存管，放于-80 ℃冰箱（为了避免解冻时冻存管中的气温急剧上升，温差过大导致的爆炸），让冻存管中的液氮挥发。
（2）冻存管取出后，以最快速度放入37℃恒温水浴锅中。如果储存装置和解冻装置相隔较远，可使用装有干冰的隔热容器临时保存和运送细胞。
细胞放入水浴中复苏时，注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动，使其受热均匀，且速度越快越好，这样可以可以避免复苏过程中细胞液中有冰晶的出现。快速升温可以使冰晶迅速融化，避免伤害细胞，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。
另外，冻存管管口不能接触到水浴锅里的液体，避免造成污染。水浴锅中的无菌水也要定期更换。
什么时候停止解冻？
（3）完全融化后，马上擦干并用75％酒精擦拭冷冻管外部进行消毒。然后在无菌环境下，用移液管吸取5ml预热的完全培养基加入15mL无菌离心管中，再吸取冻存管里的细胞悬液加入离心管中。
注意：
◆ 解冻后应尽快稀释，以减少 DMSO 的细胞毒性。
（4）根据细胞类型选择合适的离心速度，低速离心5min，吸掉上清液，加入2-3mL预热的完全培养基，用移液管轻轻吹打均匀，保证细胞完全重悬。
（5）吹打好后，用完全培养基适当稀释，然后将重悬的细胞全部移入新的培养皿或者培养瓶中摇晃均匀。
（6）最后放入37℃恒温细胞培养箱，依据细胞状态，在细胞贴壁后或 24 h 后，更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代。
注意：细胞复苏的操作在4℃冰盒中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。
常见的问题
（1）细胞复苏后，细胞数量很少
可能得原因：细胞冻存前活细胞少，状态不佳；细胞解冻速度过慢；细胞冻存悬液在常温下时间太久；未充分稀释冻存液；离心速度不恰当。
对策：
◆ 确保冻存前细胞状态良好，活细胞比例高。
◆ 加快解冻速度，尽量减少在常温下的放置时间。
◆ 确保冻存液充分稀释，避免对细胞造成损伤。
（2）细胞复苏后，很多难以贴壁
对策：
◆ 检查缓冻快融操作是否规范，避免操作不当导致的损伤。
◆ 确认冻存前细胞的密度和活率是否适宜。
（3）细胞贴壁了，却长不起来
对策：
◆ 调整细胞密度，尝试将细胞转移到较小的培养器皿中，促进细胞间的相互作用。
◆ 给予细胞足够的时间来适应培养环境，有些细胞复苏后需要一段时间才能开始生长。
此外，还需注意培养环境的无菌操作，定期检查培养基的成分和pH值，以及确保足够的营养供给和适宜的气体环境（如CO2浓度）。在处理细胞时，温和操作，避免造成机械损伤。
细胞培养是一门实践性很强的技术，需要在实践中不断学习和总结经验，希望这些建议对您有所帮助。
相信经过我们刚刚的回顾，大家了解传统的水浴锅通常不能够提供精确的
温度控制和全面的数据记录功能，不具备用户管理和追踪功能，
不符合GLP（良好实验室规范）和GMP（良好生产规范）等监管要求。
其次对于制剂以及环境的污染也是一个风险点，水浴锅内温暖潮湿的环境
适合细菌和真菌生长，这些微生物可以通过空气、操作人员或容器进入
水浴锅，由于是敞口的，气溶胶会将污染源带入空气中，容易导致环境
以及最终制剂的污染。
再者，水浴锅的操作依赖于研发、生产人员的主管判断，导致了复苏时间、
细胞摇晃频率等的差异性，影响批次间的稳定性。
Barkey干式无水复苏仪将很好的解决这些痛点，通过不断加热的循环流体
水，持续泵入两只可以耐受液氮的极薄水囊，水囊360°无死角包裹细胞袋，
水在加热水囊中循环往复，实现真正意义上的干式加热。
全自动运行：内置自检程序，开机即用
干式解冻：避免破袋或渗漏污染，影响环境及操作人员安全
封闭式加温：控温精度高，温度均匀，
搅拌器设计优化样本混匀和复苏表现
专业细胞解冻程序：标准化深低温保存细胞产品复苏程序，
结果可再现
安全可靠：全程监控，持续声光报警，高效无忧，符合GMP
全程溯源：实时记录解冻全程，保障溯源性。LIS/HIS链接，
符合15189
研发、生产阶段全血或者PBMC解冻复苏，质检阶段细胞制剂的复苏、
临床注射前细胞制剂的解冻复苏……只要你能想到的阶段，
Barkey都可以全程覆盖！
结论
Barkey 在血浆、血液和干细胞自动解冻方面拥有超过四十年的专业知识，最近专注于细胞和基因治疗 (CGT) 应用。其主要产品线用于冷冻保存样品和疗法的受控速率解冻。这些产品用于研发、临床试验、GMP 制造和医院。Barkey的plasmatherm产品是一种自动细胞解冻设备，经FDA批准作为临床使用的医疗设备。一致、可比且符合 cGMP：Barkey Plastherm C&G、Barkey varitherm 和 Barkey vialguard 是解冻血液和冷冻产品的低风险自动化解决方案。
Barkey公司于1980年成立于德国，专注于改进血浆、血液及细胞制品回输过程，预防感染及体温过低，赋能创新型细胞药物和疫苗的研发与生产，惠及全球患者。
Cell & Gene
Barkey在解冻和加热血液和血液制品方面的专业知识适应了细胞和基因治疗研究的需求。Barkey plasmatherm C&G和Barkey varitherm是用于开发新细胞和基因疗法的精确干式温度控制设备。复苏后的产物可以通过激活免疫系统等来帮助癌症治疗的研究。
上海津禾生物科技有限公司（https://www.sinobiotool.com/）成立于2018年，是国内细胞治疗，疫苗和干细胞产业领先的设备供应商，成立6年来专注服务生物医药企业，服务超过500家客户，提供涵盖从早期研发到商业化生产全生命周期的解决方案。
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