撰文：白露Eileen | 编辑：戴戴
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患者特征
该文研究人员对患者进行了腹股沟淋巴结活检，总共分析了八名接受CD19-CAR T细胞治疗的患者(六名SLE和两名SSc)。他们在五名患者(三名SLE和两名SSc)中连续进行了活检，活检在CD19-CAR T细胞治疗前(清淋前)和细胞治疗后(在B细胞重新出现之前；在CD19-CAR T细胞输注后平均60.8天)；从基线时腹股沟淋巴结和随访时的同侧(homolateral)区域进行，随访时的位置是根据前一次活检期间识别的部位形态(topographic)和超声标志确定的。他们对另外三名接受细胞治疗的SLE患者采集了非淋巴组织来分析。
研究人员将CD19-CAR T细胞治疗患者的淋巴结活检与五名接受RTX治疗的AID患者(两名SSc和三名肉芽肿性多血管炎)的淋巴结活检进行了比较，这些患者在RTX治疗开始后平均98天进行了活检，活检时外周血不存在B细胞。
CD19-CAR T细胞治疗后组织B细胞完全被清除
研究人员先展示了CD19-CAR T细胞治疗后外周血B细胞消失和免疫球蛋白(Ig)的减少与RTX的相似(图1A)。然后，他们通过超声评估腹股沟淋巴结的宏观尺寸(图1B、C)。结果显示，CD19-CAR T细胞治疗后的淋巴结尺寸与RTX的接近。
随后，研究人员对腹股沟淋巴结活检中B细胞滤泡区域进行IHC染色微观评估，这些B细胞靠近滤泡树突细胞(follicular dendritic cells，FDCs)和滤泡辅助T细胞(follicular T helper cells，TFH)。CD19-CAR T细胞治疗后的患者淋巴结中CD19+和CD20+ B细胞完全被清除；在RTX治疗后CD19+和CD20+ B细胞持续存在(图1D、E)。
在CD19-CAR T细胞治疗和RTX治疗后，淋巴结中仍可见一些常见的浆母细胞/浆细胞标记CD138+的细胞(图1D、E)。与RTX治疗相比，CAR T细胞治疗后浆细胞的增殖率较低。
▲图1: CD19-CAR T细胞治疗前后外周血和淋巴结的变化。
(A) CD19-CAR T细胞治疗前(pre-CAR)和治疗后(post-CAR)以及RTX治疗后(post-RTX)的外周血CD19+ B细胞和免疫球蛋白水平。
(Β) 在活检过程中淋巴结长轴直径的评估定量。
(C) CD19-CAR T细胞治疗前后(左侧，治疗前CAR；中间，治疗后CAR)以及RTX治疗后(右侧，治疗后RTX)的腹股沟淋巴结的代表性超声图像。
(D) CAR治疗前和CAR治疗后患者以及RTX治疗后患者的淋巴结活检的代表性H&E染色图和免疫组化图。染色细胞为CD19+ B细胞、CD20+ B细胞和CD138+浆细胞。白色箭头指示淋巴结组织中的滤泡B细胞区域。
(Ε) CAR治疗前和CAR治疗后患者以及RTX治疗后患者的淋巴结中CD19+ B细胞、CD20+ B细胞和CD138+浆细胞的定量。
GC，生发中心；ND，不可检测；Pf. Z，外周滤泡区(perifollicular zone)；Pg. Z，外周生发区(perigerminal zone)。
CD19-CAR T细胞治疗后淋巴结滤泡结构的消失
接下来，研究人员利用包括FDCs、TFH细胞和滤泡中的增殖率(图2A)等测量参数，构建了一个综合的B细胞区室结构评分(图2B、C)，旨在评估治疗后淋巴结滤泡结构的变化。
在RTX治疗的患者中，FDC网和TFH细胞大多未改变，伴随着生发中心增殖率正常(>90%)或略微降低。相比之下，虽然在CD19-CAR T细胞状态前结构正常，但在细胞治疗后，B细胞成熟区室不复存在，包括FDC网和TFH细胞的消失以及增殖率的降低(<90%)。
▲图2: 淋巴结中B细胞成熟区室的变化
(Α) CD19-CAR T细胞治疗前和治疗后以及RTX治疗后的淋巴滤泡/生发中心的代表性H&E染色图与免疫组化图，包括CD23+ FDCs、PD-1+ TFH和生发中心的Ki67+增殖细胞。
(Β) FDC评分、生发中心增殖评分(GC增殖评分)和TFH评分的热图评分。
(C) 汇总了FDC、GC增殖和TFH评分的综合B细胞区室结构评分。
(D) CD19-CAR T细胞治疗前和治疗后以及RTX治疗后的淋巴结活检中CD3+ T细胞和CD68+巨噬细胞的代表性免疫组化图。
(E) CD19-CAR T细胞治疗前和治疗后以及RTX治疗后的淋巴结中CD3+ T细胞和CD68+巨噬细胞的定量。
GC，生发中心；Pf. Z，外周滤泡区(perifollicular zone)；Pg. Z，外周生发区(perigerminal zone)。
讨论和小结
往期推送：
迄今为止，只有一篇关于肾脏移植患者接受Obinutuzumab(抗CD20单克隆抗体)的报道表明，治疗后淋巴结中实现了良好但不完全的B细胞清除。双特异性T细胞engager，如blinatumomab，也诱导外周B细胞消除，在肝转移的癌症患者和RA患者的滑膜(synovial)组织中减少B细胞，但不彻底。
该研究提示，CD19-CAR T细胞治疗的效果不仅局限于B细胞，还影响了FDCs。一种可能是，FDCs表达CD19，可能被CD19-CAR T细胞识别。另一种可能是，起源于间充质的FDCs并不真正表达CD19，而是通过一种称为trogocytosis的过程从B细胞中摄取它。关于体内次级淋巴器官的发育研究显示，B细胞是首先定植淋巴组织，然后FDCs出现。事实上，B细胞的存在对于FDCs的发展至关重要，并且已被证明依赖于淋巴毒素-β信号。在CD19-CAR T细胞治疗后患者淋巴结的重置(repopulation)也可能以类似的方式而不依赖于FDCs的情况下发生。到目前为止，没有数据显示RTX对FDCs有影响，这可以用RTX无法在次级淋巴器官中完全清除B细胞来解释。
同样，B细胞对于TFH存活至关重要，B细胞在体内的被清除导致TFH的改变。
其他免疫细胞(如T细胞和巨噬细胞)的数量未受到CD19-CAR T细胞治疗的影响，这与清淋治疗的主要作用有悖。清淋治疗影响B细胞和T细胞群体以及循环中的巨噬细胞，包括骨髓和其他组织中的巨噬细胞，没有特异性。在该项研究中，组织中其他免疫细胞的持续存在也表明，清淋不太可能是FDCs和TFH消失的原因，它们的消失很可能与缺乏来自B细胞的生存信号有关。
该文研究人员还发现，CD19-CD138+浆细胞在淋巴结中未受到CD19-CAR T细胞治疗的影响，而CD19+CD138+浆母细胞被完全清除。这些数据表明，在CD19-CAR T细胞治疗后淋巴结中检测到的CD138+细胞处于最终分化阶段，成为浆细胞。在RTX治疗的患者淋巴结中也检测到浆细胞的持续存在，并且这些患者中没有一个出现低丙种球蛋白血症。然而，它们的增殖率明显比CD19-CAR T细胞治疗的高。
全面表征浆细胞区室将需要分析骨髓活检，这些活检在当前患者队列中尚未获得。
总之，在AIDs中，CD19-CAR T细胞可完全清除组织中的B细胞，并伴随着淋巴结中FDCs和滤泡结构的消失，可能的原因如下：(1) 抗原结合和效应功能整合到同一个细胞中，(2) CD19-CAR T细胞迁移到身体的任何组织，以及(3) 它们具有连续杀死B细胞的潜力。此外，与CD19-CAR T细胞与清淋治疗联合可完全清除淋巴结中的B细胞——这一效果在使用基于抗体的B细胞清除疗法时未曾观察到。
参考文献：
[1] Tur C, Eckstein M, Velden J, et al. CD19-CAR T-cell therapy induces deep tissue depletion of B cells. Ann Rheum Dis. 2024 Aug 17:ard-2024-226142.
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