➡️在肿瘤免疫的湿实验中，很多时候我们需要先做表型实验（功能），再去做分子机制。细胞增殖既是肿瘤细胞的表型，也是 T 细胞等免疫细胞的表型。当然，目前的整体思路是干、湿结合——干实验通过数据挖掘，分析兴趣基因与增殖基因集的相关性；湿实验就是通过传统的实验来进行确认。
CancerSEA平台列举14大常见表型：血管生成，凋亡，细胞周期，分化，DNA损伤，DNA修复，EMT表皮间质转化，缺氧，炎症，侵袭，转移，增殖，静息和干性等。我们还可以从该网站下载上述表型的signature基因集。但以上分析主要是针对肿瘤微环境的肿瘤细胞，而非免疫细胞。网址：http://biocc.hrbmu.edu.cn/CancerSEA/。
对于细胞增殖表型，无论是肿瘤细胞，还是免疫细胞，都可以使用直接计数法；Brdu或Edu染色法、MTT或CCK8；细胞克隆形成实验，以及Ki-67标记来确认。但是，有些实验则是针对特定细胞类型的。比如HUVEC血管生成实验。血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2mm，都会有血管生成，这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。敲除核内PD-L1后，肿瘤细胞的血管迁移和血管生成减少。
克隆形成实验是测定细胞增殖的有效方法之一。贴壁的肿瘤细胞未必每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁且有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量，真实反映细胞群体依赖性和增殖能力。这是针对肿瘤细胞的实验；与此实验相类似，ELISPOT（Enzyme-linked Immunospot Assay）多用于检测单个免疫细胞分泌的细胞因子情况。
体外联合使用 CD3 和 CD28 抗体刺激 T 细胞，模拟 T 细胞活化的双信号，进行 T 细胞激活与扩增应用最广泛。除直接使用功能抗体外，磁珠法（CD3/CD28抗体偶联磁珠）和多聚体法（CD3/CD28抗体偶联 Streptamer 多聚体）也是激活 T 细胞比较常见的方法。以上说到的无论是抗体法、磁珠法、亦或者是多聚体法，归根结底都是借助于 CD3 与 CD28 抗体对 T 细胞进行刺激。
刺激3天后细胞形成明显克隆团
如果取上述 的 T 细胞用CFSE染色，流式检测，峰图应该如上
