基于吞噬表型的文库筛选，探究巨噬细胞和肿瘤细胞的Crosstalk，挺不错的！

学术健康 2024-09-17 00:06 上海

一篇顶百篇！这篇基于吞噬表型的CRISPR文库筛选，流程规范，表型实验经典，值得借鉴！

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单核细胞由骨髓的单核细胞前体发育分化而成，在血液中停留12-24小时，然后进入结缔组织，发育成熟为巨噬细胞，存活长达几个月。2024年5月，Theranostics杂志发表题为Targeting tumor cell-to-macrophage communication by blocking Vtn-C1qbp interaction inhibits tumor progression via enhancing macrophage phagocytosis的论文，讲的是肿瘤细胞和巨噬细胞间的细胞通讯（单细胞数据的细胞通讯是一个策略，本文是文库筛选数据）。

巨噬细胞可吞噬肿瘤细胞，但是M2型巨噬细胞无法吞噬肿瘤细胞。于是作者借助CRISPR文库，并通过构建GFP阳性的肿瘤细胞（4T1细胞），可视化巨噬细胞（Raw264.7细胞）吞噬肿瘤细胞的表型，从而筛选出与巨噬细胞吞噬相关的基因。

作者主要关注与抑制巨噬细胞吞噬相关的基因。借助细胞通讯，作者以巨噬细胞高表达的膜蛋白作为受体，肿瘤细胞高表达的膜蛋白作为配体，分析潜在的相互作用。通过分析，Vtn-C1qbp被选为候选配体-受体组合基因。

有了上述文库筛选和测序数据分析的结果，接下来就是实验验证和机制探究了。

CO-IP验证膜蛋白之间的相互作用。

表型验证。敲除Vtn1，吞噬细胞的吞噬能力下降。

机制探究。肿瘤细胞诱导M2型巨噬细胞生成。

分子机制的探究。

肿瘤的治疗。肿瘤免疫研究的终点的治疗！

肿瘤细胞中的Vtn过表达，结合了巨噬细胞上的C1qbp后，使得巨噬细胞C1qbp促进了CD16诱导的SHP1募集，抑制了Syk的磷酸化，从而导致巨噬细胞的吞噬作用被抑制。当敲除了Vtn-C1qbp这个配体-受体组合后，巨噬细胞中的Syk被磷酸化激活，促进了巨噬细胞对肿瘤的吞噬。

利用细胞通讯分析，比较容易地可以找到组间差异通讯的互作分子，这样又有表型，又有机制，还可以作为靶点进行后续研究。因此，除了单细胞数据，文库筛选的结果也可以用细胞通讯的方式来进行数据挖掘。

http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=Mzg2MTExNTkwNA==&mid=2247555646&idx=1&sn=4a273211ea89a624ecdf118967f3dc87

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