检验科常用的 13 个数值校正公式！收藏不亏

学术 2024-11-05 17:31 浙江

血小板数值校正^[1-5]

临床上计数血小板的方法主要有血小板电阻抗法（PLT-I）、血小板光学法（PLT-O）、血小板荧光法（PLT-F）及显微镜法（PLT-M），前三种属于仪器法，由于方法学固有缺陷，不能完全排除各种干扰因素对 PLT 计数的影响，常出现 PLT 计数结果假性增高或降低，当仪器检测出现异常情况时，仍需使用显微镜法进行复核。下面介绍几种可用的方法：

1、草酸铵计数法

草酸铵计数法是 WHO 推荐的参考方法，是将血液标本按一定比例稀释后充入细胞计数池（又称牛鲍计数板），在显微镜下计数一定体积内的血小板数量，经过换算得出每升血液中的血小板数。

血小板数 / L = 5 个中方格内血小板数 x 10^9/L

但此方法操作繁琐、重复性差，不易临床大量标本检测，有文献报道手工显微镜计数法在不同的操作者之间的变异系数可达 10%~25%。

2、油镜估算法

即传统方法，选取红细胞平均分布且细胞间无重叠区域计数 10 个油镜视野（OIF）下血小板总数，除以 10 即为平均血小板数 / OIF，最后 PLT 估算值 = 平均 PLT 数 / OIF x R x 10^9/L。

PLT 估算值 = 平均 PLT 数 / OIF x R x 10^9/L

注：R 值又称为视野因子，不同专家对 R 值取值存在一定差异，有的资料取值 20，在王霄霞的《外周血细胞形态学检查技术》中，R 值取值为 15。

此种方法在血涂片推片不好、厚薄不均等原因时，容易产生较大误差。

3、血小板 / 红细胞比值法

在油镜视野下找到红细胞平均分布且细胞间无重叠的区域，计数 1000 个红细胞，同时记录血小板数值，得出血小板 / 红细胞值，将此比值乘以血细胞分析仪检测的同一份标本的红细胞总数，得到血小板估测值。

血小板估算值（10^9/L）= 血小板 / 红细胞值 x 血细胞分析仪计数红细胞数值（x10^12/L）

有研究采用油镜估算法（A 法）和血小板 / 红细胞比值法（B 法）对血小板数值进行估算，与自动血液分析仪结果进行对比（如图 1、2），发现两者在估测血小板结果与血液分析仪均有较好的相关性（R2 分别为 0.894 及 0.867）。

图 1 血涂片方法 A 与血液分析仪法相关性曲线

图 2 血涂片方法 B 与血液分析仪法相关性曲线

4、高倍镜估算法

高倍镜估算法是指通过讨论 PLT 值和体尾交界处高倍镜视野下 PLT 个数的相关性，从解决 PLT 减少血涂片复查时对 PLT 值估计问题。

有研究用推片机制片，选取体尾交界处红细胞排列紧密且不折叠的高倍镜视野进行计数，计算每张血涂片体尾交界处 10 个高倍镜视野 PLT 个数，得出平均每个高倍镜视野下的 PLT 个数。随后采用拟合曲线对仪器 PLT 值与 PLT 计算值进行比较，发现相关性良好（R2=0.9614）：

图 3 仪器 PLT 值与高倍镜视野下平均 PLT 个数的线性方程

5、流式细胞术法

国际血液学标准化委员会（ICSH）和国际实验室血液学学会（ISLH）推荐的参考方法：使用荧光流式细胞仪对相对于红细胞的特异性标记血小板进行计数，并使用半自动单通道孔径阻抗计数器确定准确的红细胞计数，从而确定 RBC / 血小板比率，然后根据该比率和原始血液样本的 RBC 浓度计算血小板计数。

但该方法操作繁琐、试剂昂贵无法在临床广泛应用。

白细胞数值校正^[6-7]

1、传统的手工计数法

手工计数时用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数并破坏成熟的红细胞，然后将稀释后的标本充入细胞计数板的计数池，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，换算出每升血液中白细胞的数量。

白细胞数 / L=（N/4）x 10 x 20 x 10^6=N/20 x 10^9

注：N 为 4 个大方格内白细胞总数

当白细胞数量过高时，如超过 30x10^9/L，可加大稀释倍数（1:100 稀释）；当白细胞数量过低时，可通过计数 8 个大方格的白细胞数量，或减少稀释倍数（1:10 稀释）。

这种方法估算的白细胞，容易受到样本量多少、样本质量以及计数池中细胞分布不均匀等因素影响。

2、高倍镜计数法

白细胞计数时，尽量选择厚薄合适的部位，一般在体尾交界处，采用「城垛」式移动血涂片，避免重复计数。如果血涂片中的白细胞数分布均匀的话，可作为估计外周血白细胞数的有效方法。

白细胞计数（x 10^9/L）= 30 个高倍镜视野中白细胞平均个数 x 2 x 10^9/L

3、有核红细胞增多的白细胞校正

白细胞计数时稀释液可破坏无核红细胞，但在某些疾病影响下，外周血中可能出现有核红细胞，这些细胞会被计数成白细胞。因此，当每 100 个白细胞中存在 ≥ 5 个有核红细胞时，白细胞计数结果按下列公式进行校正：

校正公式：校正后 WBC = X x 100/（100+Y）

X：未校正的白细胞计数

Y：分类计数时，计数 100 个白细胞所见有核红细胞数

脂血标本相关指标的公式校正^[8]

脂血标本对血常规中某些检验指标会产生影响，尤其是在中、重度脂血标本，血呈浑浊状态，透光性差，高浓度的三酰甘油（TG）会对仪器检测 Hb 产生干扰，除了使得比色测定值假性升高以外，还会导致 MCHC 与 MCH 假性升高。因此中、重度脂血的全血标本使用仪器检测血常规时，需要及时校正 Hb、MCHC 与 MCH 结果，否则将干扰疾病的诊断和治疗。

对于这种类型的脂血标本，除了常用的血浆置换法之外，还可以用公式校正法，具体操作如下：

将脂血标本先用自动血液分析仪进行检测得出校正前的值，再将标本以转速 3000 r/min，离心 5 min，吸出上层脂血血浆，将吸出的脂血血浆上仪器检测，并记录脂血血浆 Hb（Hb 脂血血浆）。运用计算公式算出校正值：

Hb 校正值＝ Hb 校正前－（Hb 脂血血浆－Hb 脂血血浆 × HCT 校正前）

MCH 校正值＝ Hb 校正值／RBC 校正前

MCHC 校正值＝ Hb 校正值／HCT 校正前

高血糖标本红细胞参数的公式校正^[9]

患者高血糖时可能会干扰血细胞计数仪测定红细胞相关参数，根据血浆渗透压 = 2*（血钠 + 血钾）（mmol/L）+ 血糖（mmol/L）+ 尿素氮（mmol/L），可大致推算出血糖浓度与渗透压呈正相关。高血糖患者的红细胞内渗透压相对仪器的稀释剂是高的，计数时会对体积产生影响，从而导致 MCV 假性上升，由它计算的 HCT 偏高，MCHC 偏低。

研究发现，血糖值与 MCV、HCT 呈正干扰、与 MCHC 呈负干扰。血糖越高干扰越大，但在糖尿病常见病理范围时（Glu ＜ 23.9 mmol/L）MCV、HCT、MCHC 变化不大。

该研究采用离心法对高血糖标本红细胞参数进行校正：离心法测 HCT 使细胞内的葡萄糖分子扩散，细胞内外渗透压达到平衡，从而得出稳定的 HCT 值，根据公式 MCV = HCT/RBC；MCHC = Hb/HCT 换算，可以得到高血糖标本的真实 MCV、MCHC 值。

投稿邮箱：huanghaihua@dxy.cn

题图来源：图虫创意

参考文献：

[1] 中华人民共和国卫生部医政司。全国临床检验操作规程 [M]. 东南大学出版社，1991.

[2] 朱建锋，张莉，王蓓丽，等.2 种外周血涂片血小板估测方法的评价 [J]. 检验医学，2015, 30 (10):3.

[3] 张稳燕，周开矿，陈颖，等。外周血血涂片估测血小板的方法研究 [J]. 检验医学与临床，2016, 13 (022):3242-3244.

[4] 孙余，王平，王琳。高倍镜视野下血小板个数与血小板值的关系 [J]. 检验医学，2019, 34 (3):2.

[5]Klee G , D'Onofrio G , Assendelft O W V ,et al.Platelet Counting by the RBC/Platelet Ratio Method: A Reference Method[J].American Journal of Clinical Pathology, 2001, 115(3):460-464.

[6] 王霄霞。外周血细胞形态学检查技术 [M]. 人民卫生出版社，2010.

[7] 杨丽妙，杨洪乐，郝丽颖，et al. 显微镜视场数对血涂片细胞计数影响的研究 [J]. 河北医科大学学报，2024, 45 (4):477-484.

[8] 颜丽丹，张淑贞，黄海燕，等。公式校正法对中，重度脂血标本血红蛋白相关指标的纠正效果 [J]. 深圳中西医结合杂志，2024, 34 (1):74-76.

[9][1] 刘天霞，王青娥。高血糖症对红细胞参数的干扰及纠正方法 [J]. 检验医学与临床，2010, 07 (11):1121-1121.

http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzA5ODk1NjQwMg==&mid=2656119721&idx=1&sn=d834734aa12ae97903cb197dc985f92c

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