供稿：裴怡昊，武汉大学
校稿：冯甜，武汉大学
推送：冯甜，武汉大学
今天给大家分享的文献发表在Environmental International上，标题为Human amniotic fluid-based exposure levels of phthalates and bisphenol A mixture reduce INSL3/RXFP2 signaling。通讯研究者为法国的MITOVASC研究所的Mathilde Munier。
睾丸下降需要INSL3/RXFP2信号。雄性小鼠中INSL3或RXFP2基因的缺失会导致双侧隐睾，既往研究在子宫内用INSL3拮抗剂治疗小鼠的隐睾也证实了这一点。此外，RXFP2基因的功能突变缺失也与男性隐睾症有关。隐睾是最常见的先天性畸形之一，影响1.6%至9%的男性新生儿，在一些国家，隐睾症的发病率仍在上升，这表明孕妇和胎儿有可能暴露于内分泌干扰化学物质（endocrine disrupting Chemicals，EDC），特别是双酚A（bisphenol A，BPA）和邻苯二甲酸盐类物质。
流行病学和实验数据表明，接触邻苯二甲酸酯或双酚A与INSL3的表达和分泌有关。但既往的研究主要集中在双酚A和邻苯二甲酸酯对INSL3的产生和/或分泌的影响，然而INSL3的受体RXFP2是一种G蛋白偶联受体（aG-protein coupled receptorGPCR），它在INSL3信号传导中发挥着明显的作用，从而参与了睾丸的生理和病理生理。研究者之前的研究表明，BPA降低了FSH受体的活性，FSH受体也是一种GPCR。因此，研究者假设EDC可能干扰RXFP2功能。
研究者选择了BPA、DEHP和DBP三种普遍存在于孕妇尿液、羊水和脐带血血清等多种生物体液样本种的EDC作为暴露因素。为了了解BPA、DEHP和DBP单独或联合作用对RXFP2活性的影响，研究者研究了它们在短暂转染人RXFP2并对INSL3有反应的HEK293细胞中的作用。这种基于细胞的系统提供了特异性识别RXFP2功能破坏的可能性，并独立于可能受BPA，DEHP和DBP影响的其他途径。研究者所使用的混合物是基于在人羊水中测量的双酚A、DEHP和DBP的浓度，如表1所示。
表1 基于人羊水DEHP，DBP和BPA平均浓度组成的混合物
该研究中，研究者使用了人RXFP2克隆到pcDNA3.1Zeo（pcDNA3.1Zeo-hRXFP2）表达载体的质粒以及pGloSensorTM-22F cAMP质粒用以瞬时转染HEK293细胞系，并通过pGloSensorTM-22F cAMP质粒编码工程cAMP敏感荧光素酶来观察细胞系内cAMP的变化。
对于单一EDC的暴露效应，研究者对DEHP和DBP在10-9和10-5 M之间的浓度进行测试，BPA在10-7和10-11 M之间的浓度进行测试。对于混合EDC的暴露效应，研究者根据人羊水中DEHP、DBP和BPA的平均浓度进行了多种二元组合以及三元组合的10x，1x，0.1x的稀释。所有稀释在在DMEM/F12培养基种完成。
根据INSL3在hRXFP2上的剂量-反应曲线，研究者检测了单一EDC对两种浓度INSL3（10-9和10-6 M）的反应的影响，分别对应EC50和Cmax。研究结果如图1所示。接着研究者研究了DEHP、DBP和BPA对RXFP2下游产物的影响（图2）。对于多种EDC的混合暴露效应，研究者的研究结果如图3，4所示。总的来说，在非选择性PDE抑制剂IBMX存在的情况下，DEHP、DBP或BPA进一步增加了insl3刺激的cAMP生成。不同的EDC混合物对细胞活力没有影响。对于DBP + DEHP混合物，观察到RXFP2基础活性在1x时增加了120.7±5.7%（图3A），在0.1 x时对Cmax INSL3的响应高达129.2±11.5%（图3I）。DBP + BPA混合物将RXFP2的基础活性提高到118.6±7.8%，而对INSL3的反应没有影响（图3B， F和J）。DEHP + BPA混合物将RXFP2的基础活性和对Cmax INSL3的反应分别提高到115.8±7.4%和125.3±8.4%（图3C和K）。最后当这三种化合物混合时，没有观察到对基础活性的影响（图3D）。然而，分别使用1x和10x混合物观察到对EC50和Cmax INSL3的响应降低了12%（图3H和L）。
图1 单一EDC对INSL3刺激cAMP产生的影响
图2 单一EDC对HEK293细胞系中cAMP生成的影响
图3 EDC混合物对INSL3刺激下cAMP产生的影响
图4 EDC混合物暴露后对HEK293-hRXFP2基础活性和INSL3反应的影响
综上所述，研究者认为INSL3受体可能是参与隐睾发生的EDC的靶点。该研究阐明了一种新的生物学途径，可用于确定潜在EDC的新的作用机制。此外，几种干扰物的混合产生的影响不同于每种干扰物单独产生的影响。这进一步强调了对鸡尾酒中干扰物的强制性评估，而不是对其进行单独评估。
文章编号：444
原文链接：
https://doi.org/10.1016/j.envint.2020.105585
原文引用：
Valentine Suteaua, Claire Brieta, Maÿlis Lebeaulta, Louis Gourdina, Daniel Henriona,Patrice Rodien, Mathilde Munier*.Human amniotic fluid-based exposure levels of phthalates and bisphenol A mixture reduce INSL3/RXFP2 signaling. Environ. Int., 2020, 138: 105585.
