浙江大学易文教授团队及其合作者联合开发了一种新型化学酶法标记策略,用于活细胞中选择性标记、富集和分析核心岩藻糖化糖链。
核心糖苷化是指α-1,6-连接的岩藻糖附着在N-糖链核心五糖上的一种丰富的蛋白质修饰,广泛参与细胞信号传导、B细胞发育、抗体依赖性细胞毒性和肿瘤发生等重要生物过程。然而,目前用于检测核心岩藻糖化的工具存在特异性不足的问题,常对所有类型的岩藻糖基化表现出交叉反应。
为此,作者开发了一种新的化学酶策略,用于快速且选择性地检测核心岩藻糖化糖链。该方法利用线虫(C. elegans)中一种半乳糖基转移酶的优良底物特异性,将带叠氮基的半乳糖转移到N-糖链的核心岩藻糖残基上,然后通过点击化学引入报告基团。这一过程实现了对活细胞表面核心岩藻糖化糖链的荧光标记和成像。研究表明,该方法对多种复杂N-糖链上的核心岩藻糖展现出优越的特异性,可以集成到ELISA方法中,跟踪临床样本中IgG及其他血清蛋白的核心岩藻糖化水平变化,从而区分HCC患者与健康供体及C型肝炎或肝硬化患者的核心岩藻糖化水平差异。
该方法能够从复杂细胞裂解液中检测核心岩藻糖化的糖蛋白,并可用于活细胞表面的检测,且可集成到诊断平台中,以分析特定蛋白质的核心岩藻糖化水平。这种化学酶标记方法为疾病生物标志物的识别提供了新策略,并将使研究人员进一步探讨这种重要糖链在正常生理和疾病中的基本作用。
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