导语
当《黑神话：悟空》以国风之姿横扫全球，科研界岂能甘于平凡？
在生物学的浩瀚星空中，翻译后修饰（PTMs）正如那璀璨的新星，尤其是新型酰化修饰，简直是科研界的“筋斗云”，一飞冲天，引领潮流。景杰生物PTMab作为修饰抗体专家，不仅是国产抗体，更是全球修饰抗体的领跑者，在表观遗传领域深耕数十年，在同行中遥遥领先，在广大客户群体中备受好评。
如果科研界也有“蟠桃盛会”，那景杰生物PTMab的展位定是人头攒动，因为我们拥有全球种类最多的修饰泛抗体宝库，以及超过300种组蛋白位点抗体。但即便是“大圣”也有挠头之时，小编在科研一线，就常听到这样的“紧箍咒”式疑问：
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研究组蛋白修饰，是该请出‘组蛋白本尊’，还是来个‘全蛋白大杂烩’呢？
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我的组蛋白WB怎么成了‘无字天书’，条带呢，我的条带去哪儿了？
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别急，科研路上的“观音菩萨”——小编我，今天就来一场“内部揭秘”，为你解答这些组蛋白位点抗体使用中的“九九八十一难”！
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提组蛋白还是提全蛋白呢？
如果提全蛋白效果不错的话，其实问题不大的，此时用上景杰独家，从无败绩的HOT裂解液就更好啦~关键是蛋白取样要新鲜；
如果没有效果，就需要提组蛋白进一步尝试。
图1 全蛋白孵育PTM-112RM的效果
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提组蛋白的“独门秘籍”？
选择合适的“变身术”，让组蛋白乖乖现身吧！
具体步骤可参考：
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上样量: 少了怕看不见，多了怕浪费?
通常建议总蛋白上样量20-30 μg；根据样本修饰丰度情况适当增加，尤其是植物材料/动物组织 /细菌样本等。这就像悟空探路一样，需要找到“黄金比例”。
图2 蛋白上样量20μg
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转膜条件？
建议使用0.22 μm的NC膜（PVDF 膜也可以，但 NC 膜背景相对会干净），防止小分子蛋白转过。
更推荐传统湿转定流 200mA， 40min/定压 80V（对等的电流大概为 100mA） 1h 左右，小分子蛋白避免因转膜过度带来蛋白信号损失~
Tips：
转完膜后建议丽春红进行膜染色，判断转膜质量！！！这样才能实现蛋白的完美“穿越”。
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稀释液：抗体也爱喝“特调”？
建议使用2.5%-5%的BSA 作为一抗稀释液，按照说明书推荐稀释比进行，4℃过夜孵育（有利于与丰度低的修饰蛋白结合）。
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内参选择：谁才是我的“定海神针”？
看趋势必孵育内参，否则差异无意义。关键时刻内参也是“定心丸”。
①选择内参的原则：样本类型（内参与蛋白样本亚细胞位置一致）等。比如 H3K18la 位点修饰抗体，内参可以使用H3 。
②内参孵育方式
a.两组实验：同时制备两组膜，一组内参抗体（如 H3），一组组蛋白位点修饰抗体(如 H3K18la)。
图3 同时进行两组实验，其中一组用于内参孵育
b.抗体剥离液（剥离以后需曝光，判断是否剥离干净），剥离后从封闭开始孵育内参抗体。
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没条带？别急，可能是“隐身术”
造成组蛋白WB没条带的原因有很多，这里小编和大家一起分析一下:
①蛋白修饰降解，切记要新鲜取材，低温操作哦~
②蛋白含量少，有可能是上样量少或者是蛋白裂解不充分，建议加大上样量或者按照蛋白提取步骤充分裂解蛋白哦~
③未使用0.22 μm的膜，孔径小的膜对小分子蛋白有较好的拦截吸附作用，尽管背景可能会稍稍高一些~
④转膜转过了，确认一下你的marker是否还在膜上呢？如果不在了，需要适当缩短转膜时间哦~也可以用丽春红染色判断下转膜质量~
⑤抗体选择有误，这里有详细的抗体选择及孵育攻略哦~
⑥组蛋白修饰没有条带，可以通过内参判断到底是修饰本身丰度低，还是整个样品有bug~
如果H3条带好好的，就说明是修饰丰度低，样本没问题
如果H3也有条带或条带极弱（上样量正常的情况下），说明提蛋白这一步就没有做好
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结果显示一条线：图太丑，拿不出手？
图4 组蛋白条带粘连成线
这个就是小分子蛋白跑胶的常见问题啦！原因主要有三个：
①上样量太多，建议减少上样量;
②梳子不合适，15孔梳两孔的间隙会更小，建议使用10孔梳避免条带粘连成线;
③浓缩胶凝固不充分，以上两个原因都排除的话，造成的原因大概就是配胶时浓缩胶凝固不充分，导致样品向两边扩散进而粘连，还需要注意的是上样时不要太过用力，不然胶与胶板之间出现空隙也会造成蛋白条带粘连成线哦~
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特殊物种？我们也能“跨种族交流”
组蛋白是一类在进化过程中高度保守的蛋白质，尤其是核心组蛋白（H2A、H2B、H3 和 H4）。理论上将待研究物种的组蛋白修饰位点前后 4 个氨基酸与对应 human 的组蛋白修饰位点前后 4 个氨基酸进行比对一致的话，我们的抗体就适用于该物种。公众号后台回复“物种适用性”即可获得景杰抗体物种适用性比对结果~
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抑制剂推荐？定身“法宝”
针对组蛋白酰化修饰，裂解液在使用前除需要蛋白酶抑制剂外，还需要添加去酰化酶抑制剂（简称HDACIs），可减少细胞/组织中酰化修饰在提取过程中被去除的情况~
常用的HDACIs如曲古抑菌素（TSA）和丁酸盐（NaB/SB）可广谱性地抑制不同亚型的HDAC，浓度可参考说明书或已报道的文章。市面上也有很多公司售卖混合型HDAC抑制剂，有的厂家可提供试用装。
图5 商品化的HDAC抑制剂
科研之路虽长且艰，但有了景杰生物PTMab的“神器”相助，再加上小编的“法宝秘籍”，相信每位科研人都能像悟空一样~
以雷霆之棒，定恒心之针
火眼金睛，明察秋毫
最终取得真经！！
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