宋永杨&王树涛:介质单体调控乳液界面聚合制备纳米分形磁性粒子用于核酸分离

文摘   2024-12-26 18:31   北京  

磁性颗粒在生物样本分离中广泛应用,但现有制备方法存在磁性纳米颗粒(NPs)负载能力不足的问题。为提高负载能力,已开发自组装、共组装和生物分子结合等策略,但这些方法在稳定性上存在挑战。因此,亟需开发新策略合成高负载磁性NPs的磁性颗粒,以满足多样化应用需求。

文章提出了一种通过介质单体(如甲基丙烯酸甲酯,MMA)调控的乳液界面聚合策略用来合成nanoFMPs。介质单体有助于磁性NPs在内部相中的分散,实现更高的负载,而亲水性单体通过静电相互作用在磁性颗粒表面形成具有功能基团的表面纳米分形结构。通过从复杂的生物样品中提取核酸来进一步评估纳米FMPs的磁分离能力。

1 介质单体调控乳液界面聚合形成分形结构

Fe3ONPs被封装在nanoFMPs中时,它们的磁化强度增强,因为更多的Fe3O4 NPs被有效封装,提升了整体磁性能。这种封装还增强了颗粒的稳定性,使其不易受pH和温度变化的影响,保持了颗粒的完整性和功能性。封装的Fe3O4 NPs提供了更多的磁性活性位点,增加了与核酸等目标分子的接触,从而提高了吸附和分离效率(图2)。

2 含介质单体的纳米FMPs和不含介质单体的磁性粒子

使用光学显微镜和电子显微镜观察纳米FMPs的动态形成过程(图3),发现在聚合初始阶段可以在水相中观察到均匀的油滴,电镜下观察到获得具有薄而软的外壳的空心微球;聚合时间为15 min时,液滴体积收缩,外壳变硬;在30 min时,液滴内部变得浑浊,微球表面变得粗糙,而乳液液滴尺寸几乎没有变化;聚合时间为45 min时表面变得更粗糙;乳液液滴和颗粒在60 min时几乎没有变化,这意味着形成了纳米FMPs。

3 纳米FMPs的动态形成过程。(a-e)乳液液滴的光学显微镜图像和(f-j)不同聚合时间下获得的相应颗粒的SEM图像


随着MMA加入量的增加,水相中MMA的浓度增加,导致带负电荷的亲水单体比例减少,静电斥力减弱。因此,纳米FMPs的表面结构是可控的介质单体调节的乳液界面聚合,表现为预期nanoFMPs的表面结构会从具有较多纳米尖刺(nanospikes)的粗糙结构转变为更平滑的结构(图4)。这些纳米FMP是通过调节介质单体MMA的进料量来制备的。随着MMA的体积分别从0.2 mL增加到0.4 mL0.6 mL,纳米FMP的表面变得光滑,也说明了介质单体可以调节纳米分形结构的形成。

4 具有可调表面结构的纳米FMP的合成

图5a展示了从复杂生物样品中提取核酸的流程,包括核酸提取、磁分离、释放和RT-PCR检测。使用nanoFMPs-1进行RT-PCR扩增,发现其能高效分离核酸,Ct值最低,表明分离效率最高。进一步实验显示,nanoFMPs-1在提取SARS-CoV-2 RNA时,N基因和ORF1ab基因的Ct值较低,与市售磁性颗粒(CMPs)相比,分离效率更高。这说明nanoFMPs-1表面的纳米刺有助于提高RNA分离效率,是一种有潜力的核酸分离材料。

5 利用nanoFMPs进行核酸分离


点 评:

1. 克服了Pickering效应的限制,使得能够在基于聚合物的磁性颗粒中有效地负载磁性NPs

2. 该策略适用于一系列单体,允许含有官能团的亲水性单体和疏水性单体在水包油乳液界面处共聚。

3. 纳米FMPs的表面纳米结构可以通过调节介质单体的进料量来调节,为不同样品的分离提供可编程的候选物。


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Xinyi S ,Yue Z ,Duanda W , et al.Mediator Monomer Regulated Emulsion Interfacial Polymerization to Synthesize Nanofractal Magnetic Particles for Nucleic Acid Separation.[J].Small methods,2023,8(4):e2300531-e2300531.

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